实验9玉米幼胚再生系统的建立.doc

实验9玉米幼胚再生体系的建立

摘要以玉米幼胚作为外植体,研究了不同的培养基对玉米幼胚愈伤组织的诱导的影响及愈伤组织继代和分化的情况，结果表明，7种不同的培养基均能诱导出愈伤组织，诱导率都很高，但是分化培养基则不理想，大部分的都是枯萎没生长情况。本实验利用玉米幼胚的培养，主要目的是学习和掌握幼胚培养的一般方法，从而可以在现实生活中有所应用。

关键词
玉米幼胚愈伤组织激素
前言
玉米作为我国一种重要的禾谷类粮食作物,其组织和细胞培养研究受到人们的重视并取得了巨大的进步。在玉米的外植体培养中,对幼胚培养的研究很多,并已建立了比较完善的组织培养体系.
1材料与方法
1.1实验材料玉米幼胚玉米愈伤组织
1.2方法
1.2.1玉米幼胚愈伤组织诱导培养基
1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
2组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
4组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
6组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D2.0mg/L+NAA0.1mg/L
按照培养基的配置方法来配置以上培养基，灭菌后，分装到4个培养皿中待接种。
1.2.2玉米幼胚接种
剥去玉米包被，用75%酒精清洗，将玉米棒子切成3、4段，置于75%酒精浸5min，倒去酒精，加0.1%升汞浸泡11min，无菌水冲洗3次。用无菌镊子，小刀取出玉米幼胚，选取完好无损的幼胚接种于培养基。每个培养皿接种10粒，于25℃暗培养。
1.2.3玉米愈伤组织分化诱导培养基
1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
2组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
4组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+水解酪蛋白0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
6组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+水解酪蛋白0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L
7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+水解酪蛋白0.3mg/L+谷氨酰胺mg/L+0.7蔗糖30g/L+琼脂7g/L
按照培养基的配置方法来配置以上培养基，分装到4个小三角瓶中封口再灭菌，待接种。
1.2.4分化接种
在超净台上夹取松散的，好的玉米愈伤组织放于分化培养基中进行分化培养。于25℃光照下培养。20d观察生长情况。
2实验结果
2.1.计算及结果分析
诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体块数/接种的外植体块数）*100%
污染率（%）=（污染外植体块数/接种的外植体块数）*100%
全班数据统计
愈伤组织诱导分化培养组数诱导率污染率出绿率出苗率186.5%2.7%8.1%5.4%290.9%3%00388%0004100%10%污染590%10%100%75%697.5%000794.4%0污染
从整个班试用的不同的培养基中．玉米幼胚的诱导愈伤组织实验结果很好，诱导率很高，污染率相对比较低。分化结果不好，大部分的分化培养中愈伤变枯萎，但5组的实验结果比较理想，1组有实验结果，但出绿率和出苗率都比较低，从中得出其他枯萎了的愈伤可能是在实验过程中镊子冷却不够，导致愈伤死亡枯萎。最终对比不出来最佳的培养基和最佳的激素浓度。
2.2玉米幼胚愈伤组织诱导
玉米幼胚愈伤组织的诱导很成功，诱导率达到70%，无污染。与之前的植物愈伤组织诱导结果好很多。

2.4玉米愈伤组织的分化
玉米幼胚愈伤组织的分化失败，愈伤组织不生长，还呈现了黑色枯萎的愈伤，这可能是由于在接种愈伤的时候镊子灭菌后冷却不到位。由于1、5组分化有结果，证明培养基是没有太大的问题，不会导致愈伤的死亡。

3讨论
所谓体细胞无性系变异就是指在