医学专题—MTT法检测细胞活力精讲.ppt

MTT法检测细胞(xìbāo)活力MTT法目的(mùdì)和意义原理(yuánlǐ)
贴壁细胞操作步骤4.每孔加入10ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5.终止培养，小心吸去孔内培养液。
6.每孔加入100ul二甲基亚砜（置摇床上低速振荡10min，使结晶(jiéjīng)物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7.同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜）
悬浮(xuánfú)细胞操作步骤：药物(yàowù)的配制MTT的配制(pèizhì)实验(shíyàn)结果统计学处理实验结果(jiēguǒ)统计学处理举例(jǔlì)注意事项实验(shíyàn)前应明确的问题2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
3.时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入(shūrù)excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4.培养时间。100ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养(yíngyǎng)不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。

5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。

7.实验时应设置(shèzhì)调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。

8.避免血清干扰。用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。关于(guānyú)细胞的接种(铺板)如何(rúhé)清除上清加入(jiārù)DMSOOD值的测定(cèdìng)
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