牛结核病监测和诊断技术研究进展.doc

牛结核病监测和诊断技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium)引起的人、畜、禽共患的一种慢性传染病，由人结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、禽型分枝杆菌(M,avium)、非洲分枝杆菌以及田鼠分枝杆菌（M,microti）所引起，统称这些病原为结核分枝杆菌复合物(或群)。目前已知，结核病除感染人外还能使50多种哺乳动物和25种禽类感染，牛是最敏感的动物。牛结核主要由牛分枝杆菌引起，人结核的10%以上由牛分枝杆菌引起。每年，世界上大约有3百万人感染牛结核杆菌造成结核病。中国是世界上感染结核病较高的22个国家之一。由于牛和人类的关系(牛奶、牛肉及耕牛等)较其他动物更为密切，因此，牛结核又是任何其他动物结核病最大的传染源。其传染和流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展，不仅可以造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还能造成牛奶产乳率和乳质下降，更严重威胁着人类的身心健康。牛结核病被国际兽疫局定为B类传染病，我国将其列入二类动物疫病。结核分枝杆菌按其致病力可分为3种型，即人型、牛型和禽型，三者有交*感染现象。牛型主要侵害牛，其次侵害人、猪、马、绵羊和山羊等，在所有牛种中奶牛最为易感。牛分枝杆菌共可感染50多种哺乳动物。本病无季节流行性，一年四季均可发生，在农村主要以散发为主，规模化养牛场主要以区域性流行为主。牛结核病的潜伏期一般为16～45d，或者更长，通常为慢性。在感染初期几乎不表现出特有的临床症状。感染一段时间后，一般日渐消瘦，精神不振，频频咳嗽，毛粗无光，皮肤失去弹性，食欲不振，产奶量下降等临床症状。由于牛感染结核病的经过往往比较缓慢，根据动物患病器官的不同，表现出的临床症状也各不一致。牛结核病的临床症状主要分为以下几种类型：肺结核、乳房结核、肠道结核、淋巴结核和生殖结核等。目前，在结核病的监测和诊断中，普遍采用结核菌素皮内实验（TT）、细菌痰涂片、细菌的分离培养等传统的技术。随着科学技术的进步免疫学和分子生物学技术有了很大的发展，出现了很多适合结核病检测的先进技术，本文就对这些新老技术进行简要的概述。一、检测诊断技术的概述（一）细菌学检测技术1.结核杆菌的生物学特征。结核杆菌大小为0.2～0.5μm×1.5～4.0μm，两端钝圆，无芽胞和荚膜，无鞭毛，不运动，革兰氏染色呈阳性。人型结核杆菌细长而稍弯曲，牛型略短而粗，禽型小而粗，而且略具多形性。本菌由于细胞壁中含有大量的糖脂，普通的染色方法很难使其着染。通常采用萋尔-尼尔逊抗酸染色法进行染色，抗酸杆菌呈特征性的红色，而其它细菌和细胞呈蓝色。2.结核杆菌的培养特性。通常采集患病动物的尿液、痰、胸水、腹水、脓液或伤口分泌物和肺、淋巴结等有典型钙化灶的病变器官进行细菌的分离培养。本菌为专性需氧菌，对营养要求严格，常用罗杰二氏培养基、改良的罗杰二氏培养基、丙酮酸培养基和小川培养基培养。最适生长温度为37℃～37.5℃。本菌生长缓慢，特别是初代培养，一般需10-30d才能看到菌落。其生长速度依次为禽分支杆菌，结核分支杆菌，牛分支杆菌。菌落粗糙、隆起、不透明、边缘不整齐，呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色。在液体培养基里，因菌体含类脂而具疏水性，形成浮于液面有皱褶的菌膜。传统的结核杆菌临床诊断一般依赖于细菌学方法，其中痰涂片抗酸染色法快速，但灵敏度低，特异性差，需要观察者有丰富的经验积累，且至少需要有大于5×106/L的细菌才能检测到阳性结果，而且无法区分MTB和非MTB感染，同时不能区分死菌和活菌。此方法培养时间较长(至少2个月)，已很难满足生产与生活的需要。但是不论是何种检测技术最终的完全确诊还要以罗杰(L-J)固体培养法为金标准。（二）免疫学检测技术结核分支杆菌是细胞内寄生菌，因此机体抵抗结核分支杆菌的感染主要依靠细胞免疫。在机体感染了结核分支杆菌后，最早在机体内引起的是细胞免疫；而体液免疫是随着感染时间的延长而缓慢的增强；细胞免疫在结核杆菌感染的后期又不表现出来，所以要准确的判断动物所处的感染期，以采用合适的检测方法。1.结核菌素皮内试验（TT）。用各种提纯的结核菌素（PPD）皮内注射动物，一段时间后根据皮厚差来判断结核病的一种方法。目前该方法被世界各国广泛采用，并且是世界动物卫生组织OIE推荐的诊断牛结核病的唯一方法。该方法检出率和准确性都比较高，但用该方法不能区分致病性分支杆菌和非致病性分支杆菌感染，更不能区分致病性结核杆菌的型、在用BCG免疫的地区或国家，不能区分自然感染和免疫个体、对感染严重的个体有可能出现假阴性的结果、在一段时间内（30d），由于迟发性变态反应（DTH）不能重复进行、必须进行严格的质量控制，否则严重影响结果。同时此技术操作要求较高，主观性比较大，不能进行大规模的流行病学调查。2.间接ELISA法（iELISA）。根据抗原在固体