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实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件

、实验目的

1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。
2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。

、实验原理

在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而
求得被测物质的含量。显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的
显色条件。

三、仪器及试剂

分光光度计；1cm吸收池；10mL移液管；25mL容量瓶,100ml容量瓶
1．铁标准溶液

μ-1-1
100g·mL（即0.01mg·mL）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O于烧杯

中，用2mol·L-l盐酸15mL溶解，移入500mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。

用前，准确稀释10倍成为含铁10ug·mL-1标准溶液。

2.1g.L-1邻二氮菲：1.0g邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到1000
mL。
3.10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存）
4.醋酸钠溶液1mol/L
5.0.8mol/L氢氧化钠溶液

四、实验步骤
1、吸收曲线的制作和测量波长的选择

用移液管吸取0.0ml、2.0mL10ug·mL-1标准溶液，分别注入二个25mL容量瓶中，加入1.0mL10%的
盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2min；再加2mL邻二氮菲溶液，2.5mL醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇
匀。放置5min后，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔10nm测一次吸光度，其中在
500-520nm之间，每隔5nm测一次吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大
吸收波长。2、显色剂用量影响
在7只25mL容量瓶中，各加2.0mL10ug·mL-1铁标准溶液和1.0mL盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2
min。分别加入0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml1g.L-1邻二氮菲溶液，再各加2.5mL1mol/L醋酸
钠缓冲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。放置5min后，以水为参比，在510nm测量各溶液的吸光度。
其中，加2.0mL1g.L-1邻二氮菲溶液的显色溶液不要倒掉，用于时间影响的测定。
3、显示时间的影响

取上述1中加2.0mL1g.L-1邻二氮菲溶液的容量瓶，在显色时间为10min、20min、30min、
40min、50min、60min分别测定吸光度值。
4、溶液酸度的影响

在7只25mL容量瓶中，各加入2.0mL10ug·mL-1铁标准溶液和1.0mL盐酸羟胺溶液，摇匀后放

置2min，再各分2.0ml邻二氮菲溶液，摇匀。然后，分别用移液管准确吸取加人0.8mol·L-1氢氧化钠溶液
0.0、0.5、1.0，2.0，3.0，4.0、5.0ml于容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，放置10min。
用精密pH试纸测定上述溶液pH值，同时在分光光度计上，波长为510nm，以水为参比测定各溶液的吸光度。

五、数据记录

1.最大吸收波长的确定

波长nm440450460470480490500505510515520530540550560

吸光度
A

2、显色剂用量的影响
显色剂用量ml0.10.250.51.02.03.04.0
吸光度
A

3、显色时间的影响
显色时间min102030405060
吸光度
A

4、溶液酸度的影响
溶液pH
吸光度
A

六、结果讨论与思考
1.分别以波长、显色剂体积、显色时间、溶液pH为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制曲线，确定最大吸收波
长、合适的显色剂用量、显色时间、溶液pH是多少？2．分光测定中比色皿盛放溶液的体积为多少，用手拿比色皿
时应注意什么？

实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁的浓度

一、实验目的

1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法2．了解分光光度计的构造、性能及使用方

法

二、实验原理

邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件

下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。配合物的lgK稳＝21.3，摩

尔吸光系数＝·-1·-1。
51011000Lmolcm

在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。

4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+＋N2O＋4H＋＋H2O
测定时，控制溶液pH＝5较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价

铁离子水解，影响显色。

用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、

铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、