紫锥菊中菊苣酸的提取工艺和含量测定.docx

紫锥菊提取菊苣酸的工艺与含量测定研究
紫锥菊中菊苣酸的提取一般采用水、甲醇、乙醇和超临界萃取，但是由于：
水提取温度高，容易造成菊苣酸的氧化；
甲醇提取容易造成有机溶剂残留，降低产品的质量并带来不安全因素，因此不适合工业化；
超临界萃取由于成本较高，收率低，尚未完成工业化研究。
因此本试验采用乙醇作为工业化提取溶剂，并且对所提菊苣酸含量进行测定实验研究，旨在为紫锥菊提取菊苣酸的深入研究和市场开发提供依据：
一、紫锥菊提取菊苣酸工艺与含量测定实验仪器与材料准备
Agilent1100高效液相色谱仪；
G1313A自动进样器；
G1315BDAD二极管阵列检测器；
UV-2450紫外-可见分光光度计；
AG285分析天平；
Milli-Q超纯水仪；
DZ-2BC型真空干燥箱
紫锥菊药材地上部分→自然干燥→粉碎；
菊苣酸对照品，供含量测定用；
色谱测定用水为超纯水；
乙腈为色谱纯；
其他试剂均为分析纯。
二、紫锥菊提取菊苣酸的提取方法与结果
（一）紫锥菊中菊苣酸的提取
1.紫锥菊提取溶剂的选择
分别称取10g紫锥菊药材地上部分8份，以10倍质量的0.20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%乙醇水溶液加热回流提取2h→所得滤液浓缩后蒸干→采用HPLC测定菊苣酸的含量→计算其得率。结果见图1:

由上图可见，随着乙醇体积分数的增加，菊苣酸的逐渐升高（得率=出膏率x干膏中菊苣酸的质量分数），当乙醇溶液的体积分数为60%时，得率最高。随后，菊苣酸的得率随乙醇体积分数的增加而降低。因此选择60%乙醇作为提取溶剂。
2.正交试验设计
在预实验的基础上，选择溶剂体积(A)、提取时间(B)、提取次数(C)作为3因素，进行L9（34）的正交试验。
分别称取10g紫锥菊药材→按L9(34)正交表所列条件加入60%乙醇回流加热→滤过→滤液浓缩后置已干燥至恒重的蒸发皿中水浴蒸干后→于70℃干燥12h→置干燥器中冷却30min→迅速称重并密闭保存。
采用出膏率及菊苣酸得率作为提取工艺的评价指标，用加权综合评分，按照出膏率和菊苣酸得率的权重比(4：6)计算，并对实验结果进行分析，结果见表表1，2，3：

（二）紫锥菊提取菊苣酸结果与分析
从表2和表3可以看出，3因素的影响大小依次为A>C>B，溶剂体积对出膏率和菊苣酸的得率影响最大。最佳组合条件为A3B2C3，从降低成本、节约能耗考虑，在保证充分提取的前提下，综合分析各个因素对出膏率和菊苣酸的转移率的影响，确定提取工艺为12倍量60%乙醇回流加热提取3次，每次1.5h，合并滤液，浓缩后水浴蒸干，于70℃干燥12h，置干燥器中冷却30min，得干膏。
（三）紫锥菊提取菊苣酸所选条件的验证试验
为验证所选条件的合理性，取紫锥菊药材地上部分共3批，各100g，按确定的提取工艺进行放大试验，测得出膏率均值为21.20%（RSD0.94%），菊苣酸的得率均值为1.025%（RSD1.08%），说明该工艺条件稳定、可行。
（四）紫锥菊提取菊苣酸含量的HPLC测定
1.色谱条件
色谱柱Z0rbaxSBC18(4.6mmx150mm，5μm)；
流动相乙腈-1.0%；
冰醋酸溶液（25：75）；
流速1.0mL·min-1；
柱温35℃；
检测波长328nm；
进样量10μL。
2.对照品溶液的制备
精密称取在60℃减压干燥4h的菊苣酸对照品适量，加60%乙醇制成每mL含0.050mg的溶液，即得。
3.供试品溶液的制备
取紫锥菊药材地上部分10g→按确定的提取工艺制备干燥浸膏→取0.050g，置具塞锥形瓶中→精密加入60%乙醇50mL→密塞→精密称定质量→超声(功率250W，频率35kHz)提取10min→冷却至室温→称量并以60%乙醇补足重量→以0.45μm微孔滤膜过滤→取续滤液备用。
4.标准曲线的绘制
精密称取菊苣酸对照品适量→加60%乙醇制成11μg.mL-1菊苣酸对照品溶液→精密吸取上述溶液1，10，20，40，60，80，100μL进样→测定峰面积。
以菊苣酸峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得线性方程Y=7.8808X-60.652，r=0.9998，线性范围0.011~1.100mg。
5.精密度试验
取”2.对照品溶液的制备”项下菊苣酸对照品溶液，分次进样，各6次，记录峰面积。计算结果，RSD0.64%（n=6）。
6.稳定性试验
“3.供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液6份，每隔2h进样，分别测定峰面积，结果RSD0.71%（n=6），说明样品在12h内稳定。
7.重复性试验
取同一批紫锥菊药材制备6份供试品溶液，按”1.色谱条件”项下色谱条件独立测定6次，测得菊苣酸质量浓度分别为92.97，92.23，93.04，92.29，92.55，92.86μg.mL