结核分枝杆菌RD1区重组11.pdf

·864·中国生物制品学杂志2006年9月第19卷第5期ChinJBiologicalsSeptember2006,Vo1.19No.5

【基础研究】
结核分枝杆菌RD1区重组11kD蛋白的克隆表达及效力

陈保文徐苗徐敬华沈小兵苏城王国治

【摘要】目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力。方法构建11kD蛋白
编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚
鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的
33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5μg/ml11kD蛋白的效力与
50IU/mlTB2PPD相当。结论重组11kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂。
【关键词】结核分枝杆菌;重组11kD蛋白;效力
GeneCloning,ExpressionandPotencyofRecombinant11kDProteinatRD1
RegionofMycobacteriumtuberculosis

CHENBao2wen,XUMiao,XUJing2hua,etal(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiological
Products,Beijing100050,China)

【Abstract】ObjectiveToexpressthe11kDproteinatRD1regionofMycobacteriumtuberculosisinE.coliandtestforthepo2
tencyofexpressedproduct.MethodsConstructtheprokaryoticexpressionvectorfor11kDproteinofMycobacteriumtuberculosis,then
transformtoE.coliBL21(DE3)forexpressionunderinductionofIPTG.Purifytheexpressedproductbyionexchangechromatography
anddetermineitspotencybydelayed2typehypersensitivity(DTH)testinguineapigssensitizedwithMycobacteriumtuberculosis.Results
The11kDproteinofMycobacteriumtuberculosiswasexpressedinasolubleforminE.coli.Theexpressedproductcontainedmorethan
33%oftotalsomaticproteinandreachedapurityofmorethan95%afterpurification.DTHtestprovedthatthepotencyof5μg/mlof
11kDproteinwasequivalentto50IU/mlofTB2PPD.ConclusionRecombinant11kDproteinatRD1regionofMycobacteriumtuber2
culosiswassuccessfullyexpressedinE.coliandmightbeusedasanovelreagentforthedifferentialdiagnosisoftuberculosis.
【Keywords】Mycobacteriumtuberculosis;Recombinant11kDprotein;Potency

目前我国结核病皮试诊断及流行病学调查主要
材料与方法
采用PPD皮试,但PPD包含的抗原复杂,与卡介苗
和环境分枝杆菌均有交叉,导致现有的皮肤诊断特11主要试剂
异性差,难以区别结核杆菌感染和卡介苗接种,因NcoⅠ、BamHⅠ为BioLabs公司产品;酵母抽提
此,寻找特异性皮肤诊断抗原十分必要。随着分子物、胰蛋白胨为OXIOD公司产品;IPTG为Sigma公
生物学技术的发展,对分枝杆菌基因组比较研究发司产品;UNIQ210柱式DNA胶回收试剂盒为上海生
现,结核分枝杆菌基因组某些区域在卡介苗基因组工生物工程公司产品;其他试剂均为国产分析纯;引
中缺失,如RD1区基因在所有卡介苗菌株中均缺物由上海生工生物工程公司合成;50IU/ml的PPD
失[1]。近年来,RD1区基因编码的蛋白用于结核病(批号:2004100603)由北京祥瑞生物技术有限责