结核分枝杆菌耐药分子机制及其快速检测方法的建立费.pdf

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结核分枝杆菌耐药分子机制及其快速检测方法的建立杆菌耐药机制的研究中占据重要地位。乙胺丁醇(EIh出叫，EMB)也是重要的一遗传学专业研究生：张舒林指导教师：杨志荣结核病(TB)是当今全球范围对人类最具威胁性的感染性疾病之一，是单病因所致的感染性疾病中死亡率最高的疾病，全球每年死于结核病的人数接近200万。中国是全球结核病的重灾区，结核病发病总人数居全球第二，每年死总和。耐药结核分枝杆菌的产生和传播及结核合并HW感染是造成近年来结然而由于抗结核药物的不规范治疗，病人体内的结核菌对多种抗结核药物发生tuberculosis，MDR-TB)，这是结核病疫情重新上升的最主要的原因之一。中国结核病疫情的主要特点之一就是耐药率高，耐多药结核病人数居全球第一。因此深入开展结核分枝杆菌耐药机制研究及在此基础上建立适合临床应用的快速耐药检测方法，对于指导结核的理论意义和实用价值。利福平(rifampin，RFP)和异烟肼(Isoniazid，INH)作为快速全效杀菌剂，是目前最重要的一线抗结核药物，是当今短程抗结核化疗的基础。在结核分枝线抗结核药物，具有广谱抗分枝杆菌活性。然而分枝杆菌对EMB产生耐药的分子机制仍不十分清楚，各国学者的研究报道仍存在较多争议，亟待进一步研究。本文应用DNA测序技术分析87株来源于河南省结核病耐药监测项目收集于结核病者约25万，结核病夺去的生命多于其它所有传染病所造成死亡例数的核病死灰复燃、卷土重来的主要原因。目前对结核病治疗主要使用化学药物，耐药，从而形成耐多药结核病(multidrug病临床治疗，控制耐多药结核病的传播，以及开发新型抗结核药物均具有重大四川大学博士学位论文resistantV
的结核分枝杆菌分离株，其中对RFP、INH、链霉素(streptmycin，SM)和EMB均敏感的35株，具有不同耐药模式的耐药株52例，其中耐RFP28例。对所有菌株的耐药相关基因m旧、katG、inhA调节区和embB的突变热点区同时进行基因型分析。结果显示47例耐RFP分离株中，43株(91．5％)在利福平耐药性决定区(RRDR，rlfampin出现基因突变。共检出15种错义突变类型，涉及15种氨基酸改变。最常见的突变类型发生在531密码子上，共占全部突变株的58．1％(25／43)。49例耐INH分离株中，36例(73．5％)检出基因突变，且发生在315密码子位点。序列分析覆盖了／nhA调节区的DNA序列，共检出4例(8．2％，4／49)在一15碱基位点发生C—T的置换。其中，l例同时伴随katG点突变，另3例不伴随katG点突变。79．6％(39／49)的耐INH分离株至少在katG包括M306V(ATG—GTG)，M306L(ATG—CTG)，M306I(ATG—ALTA)，密码子位点检出基因突变。而对RFP、INH、SM和EMB均敏感的35例结核分枝卡T菌分离株中，它们的rpoB、katG、inhA调节区和embB基因均未检出相应的突变。对rpoB、katG与embB306位点的突变对比分析。研究结果表明结核分主要因素。研究结果也初步揭示embB306位突变可能并不是结核分枝朽菌对EMB产生耐药的直接原因，而可能与耐多药产生相关。本文首次对耐药结核分枝杆菌embB306位点与rpoB基因和katG基因突变的相关性进行了初步分析，结果表明耐药结核分枝杆菌embB306位点突变同时伴随rpoB基因突变为100％(19／19)，高于同时伴随katG315位点突变(73．7％，14／19)。为进一步研究结核分枝杆菌耐多药与EMB耐受的分子机制提供了必要的信息。本研究结果为研制和开发耐药结核分技杆菌快速检测方法奠定了长期以来结核分枝杆菌药敏试验一直是结核病细菌学诊断中至关重要的技47例，耐INH例，耐EMB315位点或inhA调节区发生一种突变。28侈*IEMB耐药株中，16例(53．4％)在embB306密码予发生基因突变，突变类型M3061(ATG----}ATI')年[1M3061(ATG—ATC)5种类型。其中M3061(ATG_ATc)突变类型为围内首次报道。在24例对EMB敏感而对RFP矛I]INHgO’』药的菌株中，4例(16．7％)也在306枝杆菌耐RFP主要由rpoB基因突变引起，最常见的突变类型发生在531密码子。耐INH与katG基因和mhA基因调节区突变有关，J|．katG315密码子