结核分枝杆菌Ag85B与IL212基因真核共表达质粒的构建及.pdf

466ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmunol)2004,20(6)

·论著·文章编号:1007-8738(2004)06-0664-03

结核分枝杆菌Ag85B与IL212基因真核共表达质粒的构建及表达

江山,朱道银3,骆旭东,陈全,蒋英(重庆医科大学微生物学教研室,重庆400016)

Constructionandexpressionoftheeu2关键词:结核分枝杆菌;Ag85B;IL212;共表达载体
中图分类号:R378.91文献标识码:A
karyoticcoexpressionplasmidcontaining
Ag85BgeneofMycobacteriumtuberculo2
结核病(TB)是严重威胁我国人民健康的传染性
sisandIL212gene疾病,目前全球结核病的疫情再度增高。由于卡介
苗()的免疫保护效果极不稳定因此寻找安
JIANGShan,ZHUDao2yin3,LUOXu2dong,CHENBCG,,
Quan,JIANGYing全、稳定、高效的新型结核病疫苗势在必行。基因疫
DepartmentofMicrobiology,ChongqingUniversityofMedicalSci2苗是疫苗研制的第3次革命,有可能为TB的防治提
ences,Chongqing400016,China供新的思路。我们将结核分枝杆菌(MTB)保护性抗
原Ag85B与IL212基因,同时克隆入真核表达质粒
Abstract
中并在细胞中表达为新型
AIM:ToconstructaeukaryoticcoexpressionplasmidcontainingpBudCE4.1,COS27,TB
Mycobacteriumtuberculosis(MTB)Ag85BandIL212genes.基因疫苗的研制奠定了基础。
METHODS:MTBAg85BgeneandIL212genewereclonedinto
pBudCE4.1whichhasmultiplepromoterstoconstructrecombi21材料和方法
nantplasmidpBud85B2IL12.Therecombinantplasmidwas1.1材料质粒psIL212由美国GrahamJ.Liechke博
transfectedintoCOS27cellsandtheexpressionoftargetgenes
士惠赠,其中p40、p35两个亚单位基因由45bp的
wasassessedbyRT2PCRandELISA.RESULTS:Theexpres2
linker连接1。多启动子共表达载体pBudCE4.1购自
sionsofAg85BandIL212couldbedetectedinCOS27cells.
Invitrogen公司。COS27细胞及E.coliTop10由本实验
CONCLUSION:TherecombinantplasmidpBud85B2IL12was
室保存。结核分枝杆菌购自中科院微生物研
constructedandexpressedsuccessfully,whichlaysthefounda2H37Rv
tionforfurtherdevelopmentofDNAvaccineagainsttuberculo2究所。pfu酶、细菌基因组DNA抽提试剂盒、RNA提
sis.取试剂盒、cDNA逆转录试剂盒及琼脂糖等,均购自
Keywords:Mycobacteriumtuberculosis;Ag85B;IL212;上海生物工程公司。限制性内切酶、快速连接试剂
coexpressionvector盒购自TakaRa公司。质粒纯化抽提、胶回收和PCR
摘要产物纯化试剂盒,均购自上海华舜生物公司。
目的:构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL212基因的共表达载体RPIM1640培养基和胎牛血清购自Hyclone公司。
pBud85B2IL12。方法:将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL212Lipofectin购自Invitrogen公司。小鼠IL212ELISA检测
基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4.1中,构试剂盒购自Endogen公司。
建真核共表达质粒pBud85B2IL12。以pBud85B2IL12转染COS271.2方法
细胞,通过RT2PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结1.2.1真核共表达质粒pBud85B2IL12的构建(1)
果:在COS27细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结
pBud85B质粒的构建:根据GenBank登录的Ag85B全
论:pBud85B2IL12共表达质粒的成功构建