减毒沙门氏菌介导的小鼠肝炎病毒S1基因DNA疫苗的免疫特.pdf

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减毒沙门氏菌介导的小鼠肝炎病毒!"基因
#$%疫苗的免疫特性分析

焦红梅，焦新安"，殷月兰，潘志明，孟松树

（扬州大学生物科学与技术学院江苏省人兽共患病学重点实验室扬州$$(%%1）

摘要：根据D*AE.AF公开序列自行设计一对引物，通过G35HIG扩增出小鼠肝炎病毒的全长J#基因，并将其插入
真核表达质粒KLMN#中，构建出重组真核表达质粒KLMN#5J#。将重组质粒转染IOJ5"细胞，采用间接免疫荧光检
测出J#蛋白的体外表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌JP"$%"中，构建出运送QRM疫苗的重组沙门氏菌
JP"$%（"KLMN#5J#）。分别以(S#%0I)T、#S#%1I)T、$S#%1I)T剂量的重组菌口服接种2周龄EMPEU@小鼠，试验结
果表明，重组菌对小鼠具有良好的安全性。以#S#%1I)T剂量的重组菌口服免疫小鼠，抗体检测结果显示，在二免
后两周和三免后两周，重组菌免疫组的血清抗体水平与JP"$%（"KLMN#）空载体免疫组间分别存在显著性差异（!V
%W%(）和极显著性差异（!V%W%#）。在三免后两周重组菌免疫组出现了较高水平的肠黏膜抗体。
关键词：小鼠肝炎病毒；J#基因；减毒沙门氏菌；安全性；免疫特性
中图分类号：J0($W2(文献标识码：M文章编号：%%%#52$%1（$%%"）%#5%#&#5%(

小鼠肝炎病毒（X;-Y*C*K.Z9Z9Y[9,-Y，X\L）又称再将J#基因与真核表达质粒KLMN#进行连接，构
小鼠冠状病毒（8;-Y*@;,;A.[9,-Y）。X\L为有囊膜建出重组真核表达质粒KLMN#5J#，并进行了真核表
的GRM病毒，与其他冠状病毒不同，X\L组织趋向达，然后将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌JP"$%"中，
［］
性广泛，可感染呼吸道、胃肠道、神经系统和肝脏#。构建出运送J#基因QRM疫苗的重组减毒沙门氏菌
X\L主要有&种结构蛋白：J蛋白、X蛋白和R蛋JP"$%（"KLMN#5J#），并对其诱导机体产生免疫应答
白。J蛋白构成冠状病毒表面的囊膜，具有调节冠的情况进行了初步探讨，为进一步研究冠状病毒功
状病毒与靶细胞的吸附，促进细胞融合并影响细胞能基因的作用奠定基础。
病变效应［$］以及激活体液免疫和细胞免疫应答的重
"材料和方法
要生物学特性；J蛋白的变异在冠状病毒致病性方
面起着重要的作用［&］。"&"材料
QRM免疫可将免疫原基因在宿主体内表达出"&"&"病毒、细胞、质粒和菌株：小鼠肝炎病毒
抗原蛋白从而引起机体免疫应答。特异性的QRM（X\LM(1）由中国医学科学院实验动物研究所提
免疫已广泛的在病毒性、细菌性和寄生虫性疾病的供；KXQ#053购自大连宝生物公司；真核表达质粒
［!］购自公司；为本室保存；减毒
动物模型中得到证实。但直接用QRM免疫存在KLMN#]A[9Z,;^*AQ\(!
鼠伤寒沙门氏菌［（）
需要制备大量的纯化质粒、QRM摄取效率低或需特JP"$%"$&&"B2(_GM‘C9YD!2
殊设备等缺点。减毒沙门氏菌作为运送真核表达质".,;M!%"（3IJ.,;M(!!：3A#%）］由美国斯坦福大学
粒的载体已得到广泛研究。减毒沙门氏菌可通过黏JZ;@F*,博士惠赠。
膜途径如口服或滴鼻等免疫，激发机体产生有效的"&"&’酶和试剂：3,9=;4#GG*.^*AZ购自]A[9Z,;^*A公
全身和局部的保护性免疫。重组沙门氏菌能激发机司；X5XPL反转录酶、GR.Y*抑制剂GA.Y9A购自
［(，2］公司；限制性内切酶（、）、
体产生针对载体和外源抗原的免疫应答。H,;8*^."#$\#%&’#3!
为了从分子水平上探讨X\LJ#基因的免疫机QRM连接酶和H/,;+*YZ#GQRMK;4/8*,.Y*购自大连宝
制，本研究利用G35HIG技术，先获得X\LJ#基因，生物公司；转染试剂49K;a*@Z.89A*$%%%购自]A[9Z,;^*A

基金项目：国家自然科学基金（&%!$(%&#）；江苏省重点实验室开放课题（%$"&012%&#!）
"通讯作者。3*4：025(#!5"1"##&2；).6：025(#!5"&##&"!；758.94：:9.;</=->*?->@A
作者简介：焦红梅，（#1"&B），女，内蒙海拉尔人，讲师，博士研究生，主要从事病原微生物分子免疫学研究。758.94：:9.;C8$%%(<#$2>@;8
其他作者：王禹，蒋金金

收稿日期：$%%25%"5%!；