一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112011476A(43)申请公布日2020.12.01(21)申请号202010725804.3C12N11/14(2006.01)(22)申请日2020.07.24C12R1/01(2006.01)(71)申请人河北科技大学地址050018河北省石家庄市裕华区裕翔街26号申请人河北华药环境保护研究所有限公司(72)发明人刘艳芳刘晓帅高玮李再兴吕建伟吕永涛(74)专利代理机构石家庄新世纪专利商标事务所有限公司13100代理人彭锂(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N11/084(2020.01)C12N11/10(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法(57)摘要本发明涉及一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，（1）获得脱氮硫杆菌的水溶液；（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，加热中使其变成粘稠液体，冷却后向其中加入火山岩粉，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉；（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合制得用于包埋的包埋体；（5）将包埋体和包埋剂混合均匀，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；（6）得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。本发明的固定化微球具有较高的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，具有很高的实际应用价值。CN112011476ACN112011476A权利要求书1/2页1.一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤，（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在95-99℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到50-60℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在115-125℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，所述包埋体和包埋剂的质量比8:1-10:1，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。2.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温28-32℃，培养12-24h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5-6份，硝酸钾2-3份，碳酸氢钠1-2份，磷酸二氢钾1-2份，六水合氯化镁0.5-1份。3.根据权利要求2所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，离心机转速为3000-4000r/min，离心时间为5-8min。4.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（2）中得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为7.5%-10%，海藻酸钠的质量分数为0.8%-3%，火山岩粉的质量分数为0.5%-5%；冷却温度为20-26℃。5.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。6.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为48-72h，浸泡完成后捞出后在95-100℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成牡蛎壳然后烘干；步骤（3）中，灭菌为将在紫外灯下照射25-30min。7.根据权利要求6所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：所述盐酸的质量分数为3%-5%；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成40-60目，然后在120-160℃下烘干。8.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，步骤（3）得到的牡