乙型肝炎病毒的基因工程与疫苗.pdf

遗传HEREDITAS(Beijing)7(6);25-311985

乙型肝炎病毒的基因工程与疫苗
何葆光
（卫生部上海生物制品研究所）

乙型肝炎是全世界广泛流行的传染病之w或r。故可组成adw,adr,ayw,ayr4种主
一。它可经输血、胃肠道、母婴及昆虫叮咬等途要亚型。在我国汉族中流行的主要是adr型。
径传播。据统计，乙型肝炎携带者在全世界约欧美及我国部分少数民族中ay型较多。此外，
有2亿人，其中半数在我国。母亲带毒往往传还有次亚型。整个病毒的包被抗原是由脂类和
给婴儿。患乙型肝炎的婴儿由于免疫功能的影蛋白质组成，约一半蛋白质上还联有糖基。
响，大多数演变为慢性乙型肝炎病毒携带者，其HBsAg经化学方法处理后，可进一步分为亚基。
中部分可能诱发肝癌。为此迫切需要一种能预关于亚基的数目及大小还无统一的看法。最能
防乙型肝炎的疫苗。代表HBsAg抗原性的是由亚基PI和Pit所构
随着分子生物学的发展，七十年代产生了成的二聚体『‘，。pi是一个分子量为24,000左右
基因工程技术，这在生物学领域内是一场大革的多肤。‘P11的蛋白质完全与P[相同，只是还
命。这种技术在乙型肝炎病毒的研究中也得到联有分子量为4,000左右的糖基〔710除P[和
了广泛的应用。目前乙型肝炎病毒基因工程的pit外，还有含量较少的4-7种亚基，分子量为
研究已从前一阶段的基础理论实验室研究转向40,000-90,000.游离状态的HBsAg的亚基抗
生产工艺实际应用阶段。不少工厂正在研制这原性较弱，当装配成22毫微米颗粒时，才有强
种基因工程疫苗，有的已上了人体并取得令人的抗原性。在分析基因工程表达产物时这一点
鼓舞的结果［11,21。本文拟将近年来乙型肝炎病毒是必须考虑的。
基因工程中的克隆、表达及疫苗〔3-57等作一概要乙型肝炎病毒的核心中存在着长度约为
的介绍。3,200个核昔酸部分双链的环状DNA分子。长
链上除了有一个小缺口外，其长度等于病毒
乙型肝炎病毒的结构DNA全长。短链的5'端位置固定在离长链缺
乙型肝炎病毒是直径为42毫微米的球形口250个核营酸处，3'端则由于双链区长度不
颗粒，可分为表面的包被抗原和27毫微米的核同而位置不固定，其长度为总长的50-100%.
心两个部分。核心具有感染性，提纯的核心抗不等。这些缺口可能与病毒DNA整合人宿主
原使机体产生的核心抗体不能保护其免受乙型基因的机制有关8。除了DNA之外，乙型肝炎
肝炎病毒的感染。相反，病毒表面的包被抗原的核心中还有分子量为20,000左右的核心抗
无感染性，提纯的表面抗原则是制备乙型肝炎原（HBcAg,DNA聚合酶及能使HBcAg磷酸
疫苗的有效成份。在患者血液中经常存在着单化的蛋白质激酶等。e抗原（HBeAg）以前认为是
由病毒的包被抗原组成的直径为22毫微米的病毒核心的成分，但近来的研究认为是HBcAg
球形或长形颗粒。的分解产物。同复制表达有关的S抗原，现认
病毒包被所含的抗原称为乙型肝炎表面抗为不属于乙型肝炎病毒(HBV）本身的成分，而
原（HBsAg)。不同来源的HBsAg有一共同的
HeBaoguang:GeneticEngineeringandVaccineof
抗原决定簇：。此外还有亚型决定簇d或y及HepatitisBVirus

．25．
是一种与HBV在感染机体过程中依赖于HBV2个小片段外（正好不影响氨基酸编码的位
繁殖的不完全病毒。相），相互间能对得起来。
有了核营酸序列就可以从3个不同位相进
HBVDNA的克隆
行推算。结果认为DNA长链有4个可能的蛋
最早进行乙型肝炎病毒基因工程研究的是白质编码区，已肯定的是HBsAg和HBcAg基
法国巴斯德研究所。他们于1978年底报告把因位置，二者相距1,000个核昔酸左右。此外
ayw亚型的病毒DNA克隆人大肠杆菌获得成还有一个可能是DNA聚合酶的编码区，按推
功E93。很快在美、英几个不同的实验室也都获得算它含832个氨基酸残基[8l。其他的编码意见
含乙型肝炎病毒DNA的大肠杆菌菌株［110-171。我尚不一致。在HBsAg基因前，可能还存在含
国和日本也得到含adr亚型病毒基因克隆。他163个氨基酸编码的前HBsAg基因区（PreS),
们都是把病毒DNA抽提出来，在DNA聚合意味着有HBsAg前体存在。关于Pre-S的作用
酶作用下把单链区补齐。用限制性内切酶Eco是有争议的。
RI（或BamHI）切开后，分别与;LgtWES·AB,把对HBsAg基因分析所推测的HBsAg氨
PACYC184E1'I,PBR322或pBR325相联，输人基酸顺序和Peterson['，对ayw亚型HBsAgP[直
大肠杆菌。用乙型肝炎病毒DNA为探针的接进行氨基酸顺序测定的结果进行对比是相符
杂