钙信号转导途径介导肺炎链球菌侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞.pdf

!"卷#期微生物学报’()*!"1(*#
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钙信号转导途径介导肺炎链球菌
侵袭人肺!型上皮细胞
尹一兵徐邦牢罗进勇朱旦孟江萍

（重庆医科大学检验系重庆!%%%&#）

摘要：用98:-B=?特异性9C6D8EF:))(=G=?荧光染料，观察肺炎链球菌（!"#$%"&’&’’()%*$(+&*,-$）
作用细胞前后的细胞骨架重排情况；用细胞松弛素预处理细胞，观察肺炎
H3!498:-B=?+H3!4
链球菌对细胞的侵袭率；使用预处理细胞，观察其与细胞骨架重排百
H3!4+:B0(),?,H3!498:-B=?
分率间是否存在剂量依赖关系；用荧光探针负载细胞后测定肺炎链球菌粘附
9I0:8$JHKH3!4
细胞后的胞内$L浓度。结果发现肺炎链球菌作用细胞后，细胞骨架呈块状、
H3!4D:H3!498:-B=?
丝状聚集；而松弛素可明显降低肺炎链球菌对细胞的侵袭率；肺炎链球菌粘附细
+H3!4H3!4
胞后胞内$L高于对照；可部分抑制细胞细胞骨架重排，且与细
D:+:B0(),?,H3!498:-B=?98:-B=?
胞骨架重排百分率间存在量效关系。以上结果提示肺炎链球菌可通过D:$L细胞信号转导途
径触发细胞细胞骨架重排，进而导致肺炎链球菌侵袭细胞。
H3!498:-B=?H3!4
关键词：肺炎链球菌，肺型上皮细胞（），细胞骨架，信号转导，侵袭
!H3!4
中图分类号：M"27N&文献标识码：H文章编号：%%%&8#$%4（$%%"）%#8%2778%3

肺炎链球菌（!"#$%"&’&’’()%*$(+&*,-$）是一种常见的革兰氏阳性致病菌，临床发病率和
死亡率均较高［&］。肺炎链球菌是一种侵袭性细菌，但致病机理尚不十分清楚，有文献资料
报道，肠致病性大肠埃希氏菌（<?B,0(E:BF(@,?=-.)’/$#,’/,-’&0,，<O<D）及沙门氏菌（!-0+&1
［，］
*$00-）等$"革兰氏阴性致病菌粘附宿主细胞可使胞内D:$L浓度增加，由此触发98:-B=?细
胞骨架重排，进而侵袭宿主细胞。D:$L除具有信号转导功能外，还具有直接参与由细胞内
肌动蛋白（H-B=?）引起的兴奋8收缩耦联效应这一重要的生理功能。基于此，本文旨在探讨
肺炎链球菌是否通过钙信号转导触发细胞骨架重排，进而侵袭细胞，这将为最
98:-B=?H3!4
终阐明肺炎链球菌的致病机理提供科学的理论依据，为开发新一代治疗肺炎链球菌感染
性疾病的药物提供新思路。

!材料和方法

!"!材料
!"!"!菌株和细胞株：肺炎链球菌"型标准菌株DKDD（P）"&$%"，购自中国科学院菌种
保藏中心。肺型上皮细胞（），购自中国科学院上海细胞研究所细胞库。
!H3!4
［］
!"!"#主要试剂：DLQ半合成肺炎链球菌培养基，含酵母抽提物!，6RHP血平板；MO8

基金项目：国家自然科学基金资助（"%&2%%3%）
作者简介：尹一兵（&43#5），男，重庆市人，硕士，副教授，主要从事细菌致病的分子机制的研究。6,)：7#8$"8
#7!73#37；9:;：7#8$"8#7!73%%3；<8.:=)：>=/=?@>=?A$&-?*-(.
收稿日期：$%%"8%&8"&，修回日期：$%%"8%78%&
$期尹一兵等：钙信号转导途径介导肺炎链球菌侵袭人肺"型上皮细胞=O)

细胞培养基，用于培养细胞，购自；购自杭州四季青生物工程材
!"#$%&’(%)*"+,-.,/.,/
料研究所，特级，无支原体；胰酶购自/0123，溶于的4+/（&5#66789:，;<=5%），浓度为
&5>(?；."@,A4B3887CDCE、.F13A>9’!、G3H1780E0、"型胶原酶、细胞松弛素G均购自/CI63。
!"#肺炎链球菌培养
将肺炎链球菌接种于培养基中，，水浴静置培养至对数生长中后期（
,JKL=M!"$>&
N&5%约#&O,.P96:），用于整个实验时，先离心（>(&&196CE，#&6CE），再用预冷的4+/
（&5#66789:，;<=5%）洗L次，不含双抗Q4!"#$%&培养液体悬浮至#&O,.P96:浓度。
!"$%&’()*+的%,-.&/0’112*3*+荧光染色
肺炎链球菌作用后：将细胞接种于带小块盖玻片的孔培养板板孔中，每孔
!"$"!’(%)>%
约#6:，细胞浓度约>R#&%96:，待单层生长后，吸出孔内培养液，用4+/冲洗L次，加入
肺炎链球菌菌液，然后加入不含双抗的培养液，轻轻混匀，，温育
#&!:Q4!"#$%&#6:L=M
>B，吸出孔内液体，夹出小盖玻