兔坐骨神经实验性电损伤后雪旺细胞延迟整流钾离子通道.pdf

$$!!实用医学杂志!""#年第!!卷第$"期

兔坐骨神经实验性电损伤后雪旺细胞延迟整流
钾离子通道的活动变化

付国强李学拥王伯良曹义战

摘要目的：观察成年兔坐骨神经受到%&’电压损伤后雪旺细胞延迟整流钾离子通道的变化情况。方法：建
立兔坐骨神经电损伤及切割伤实验模型，应用双酶消化法分离受损区域神经雪旺细胞，分别选择未受损伤时、损伤
后第(、%、$"天作为观察点，应用膜片钳全细胞记录雪旺细胞延迟整流钾离子通道的变化情况并相互比较。结果：雪
旺细胞延迟整流钾离子通道在神经受到电损伤及切割伤后活动均较未受损伤时逐渐增强，并在第%天左右达到高
峰，随后下降，和相应的雪旺细胞的增殖能力呈正相关。两种损伤之间比较，离子通道活动差异无显著性。结论：在神
经受到%&’电压损伤后，尽管雪旺细胞延迟整流钾离子通道自身受到%&’电压损伤，但未造成功能的破坏和活动
的改变，离子通道活动表现出与切割伤同样的变化趋势。
关键词电击伤钾通道许旺细胞膜片钳术坐骨神经

离子通道是细胞兴奋、分化和生长发育的重要结(%S水浴条件下，"<!&T胰蛋白酶消化(".07，然后
构基础。研究表明雪旺细胞延迟整流钾离子通道和雪加入少量培养液中止反应，轻轻吹打数次，$""目滤网
旺细胞自身增殖密切相关?$@。本实验利用膜片钳全细过滤，将未完全消化的神经组织继续用胶原酶消化$
胞记录技术，观察雪旺细胞延迟整流钾离子通道在受5。用含血清的培养液终止，吸管将其吹散，离心)""
到%&’电压损伤后其活动所发生的变化，以探讨离子UP.07V#.07。去上清，将沉淀悬浮于!"TDE,E培
通道在受到电损伤后的变化。养液中，差速贴壁?!@尽量除去成纤维细胞杂质，贴壁的
!材料与方法雪旺氏细胞可用于后续实验。
$A$实验动物与主要试剂中国本兔!$只，雌雄不$AW雪旺细胞延迟整流钾离子通道的变化情况记
拘，体重!B!<&C8，由第四军医大学实验动物中心提录
供。主要试剂：DE,E培养基*FGHIJ公司+，新生牛血$AWA$主要仪器膜片钳放大器*I,X-!(""VY05Z7
清*杭州四季青生物工程有限公司+，胰蛋白酶、!型[Z53=7+，两位电极拉制仪*NH-%，Y/U0R508=+，水压式
胶原酶*KGFEL公司+，M,N,K、O,L*KGFEL公司+。微操纵器*\]-(VY/U0R508=+，笔式记录仪*J.70/>=]O
$A!动物模型制作将实验动物随机分为!组，损($""VK/7-=0V^/_/7+，微波管电极用外径$<&..的毛
伤组$)只，按照损伤方式的不同平分为电损伤组和细玻璃管*Y/U0R508=+，应用_IQLEN)<"软件进行数
切割伤组；正常对照组(只。由兔耳缘静脉注射!"据采集。
8PQ戊巴比妥钠*(".8PC8+麻醉动物，仰卧位四肢固$AWA!细胞外液及电极内液的配制?$@细胞外液
（）
定，剪去臀部和下肢的皮毛，在下肢后侧正中线右腘..Z1PQ：$W"Y/I1，&[I1，&I/I1!，$$葡萄糖液，!
（）
窝至臀大肌剪开皮肤，在腘窝处分离皮下组织寻找腘E8I1!，$"M,N,K，$"O,L。电极内液..Z1PQ：!

神经，然后沿神经走行剪开肌肉充分暴露坐骨神经，E8I1!，$!"[I1，$$,FOL，$$葡萄糖液，$"M,N,K，$

使其与周围组织分离。电损伤组自腘窝至骶骨区域内I/I1!。用$""..Z1PQOU0RMI1将_M值均调整到%<W。
%&’电压损伤(>.神经!R，缝合伤口以备后续实$AWA(玻璃微电极的制备由玻璃微电极毛胚经电
验。切割伤组用剪刀剪断坐骨神经，缝合伤口。两个受极拉制器两步拉制而成，尖端为直径$".左右，选用
损组观察点都为损伤后第(、%、$"天，每个观察点(冲灌以后阻抗为&.#左右的电极。
只。正常对照组未接受损伤。$AWAW全细胞膜片钳记录倒置显微镜下，在微操
$A(雪旺细胞分离严格无菌取材受损区域坐骨神纵器操纵下，进行全细胞膜片钳记录，膜片钳记录均
经，置于预先装有少量M/7CR液的培养皿中，在超净在室温下进行。
工作台中，解剖显微镜下仔细除去血污及神经外膜，$A&数据处理及统计分析实验数据以电流密度
反复冲洗几次，用眼科剪将其剪成!..(大小的碎块，（电流P电容）表示，应用KNKK$$<"软件将所得数据进
行配对!检验，"‘"<"&为差异有显著性，实验数据
以均数标准差（）表示。
作者单位：西安市，第四军医大学唐都医院烧伤整形科a#$%
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*付国强，李学拥+，急诊科*王伯良，曹义战+"
通讯作者：李学拥,-./01：234560789:..;<=3;<>7!A$延迟整流钾离子通道的确认与特性在本实验
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中，钳制细胞于./"&0，刺激电位.1"23/