白血病微小残留病检测方法及临床意义.pdf

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白血病微小残留病检测方法及临床意义Mod锄Pr“e以ve文莉莉【临床与预防】hv¨dizati蚰。外联合应用荧光激活细胞分选技术分选CD3“细胞来分析白血摘要：尽管目前白血病的完全缓解率有很大提高，但完全缓解(CR)后复发是目前白血病治疗面临的难题之一。患者体内微小残留病(MRD)与白血病复发密切相关，研究证明MRD的有无及其高低不仅反映了个体对治疗的反应情况。而且在自血病早期复发的预示中有显著作用；检测MRD还可以帮助医生在明确白血病细胞生物学的基础上决定治近年来，由于白血病新的治疗策略的改进，新的抗白血病药物的发现，使白血病的完全缓解率有很大提高，同种或自身骨髓移植(BMT)后5年生存率已达40％一50％【”。但完全缓解(CR)后复发是目前白血病治疗面临的难题之一，近年来研究发现．微小残留病与白血病复发密切相关。微小残留白血病disea跎，MRD)是指白血病经过治疗完全缓解后残留在体内少量白血病的状态。急性白血病病人初发时．体内的恶性细胞数超过10心，临床完全缓解传统形态学标准是：光学显微镜下骨髓形态正常，原始细胞<5％。但病人体内仍可能存在10，o以下的恶性细胞，若不进行进一步化疗。大多数病人会在很短的时问内复发，所以必须进行缓解后治疗。而医生不管残留白血病细胞的多少，按照经验对病人治疗；是否停止治疗也不是依据残留病灶是否存在。从而导致MRD水于延长患者的生存期。因此。研究MRD非常雹要，它可以帮助医生在明确白血病细胞生物学的基础上决定治疗方案．从而床应用进行综述。免疫组化的优点：(1)可使用多种单克隆抗体来检测肿瘤细胞；(2)可对微弱反应抗原的放大反应来提高检出率；(3)可对免疫染色的肿瘤细胞进行形态学的确证。缺点是：(2)工作量大；(5)需要有经验的病理学专家进行诊断。初诊时可作白血病细胞的常规核型检查，以明确异常克隆在数量和结构上的改变．并用作缓解后检态学缓解的同时伴随着异常核型的消失。处于CR期的患者检有复发的可能。尽管70％的病例出现异常核型，但异常核型作它的灵敏度太低，且需要增殖期的白血病细胞。荧光原位杂交技术使用染色体特异或基因特异的DNA探针来鉴定染色体数量和结构异常，是检查细胞分裂问期和中期染色体的有效工具。兀SH分析用的DNA探针可以是的主要优点是提高了检测染色体结构重排的能力。尤其是可以检测间期细胞。但F1SH检测灵敏度为1％，方法较复杂，且容易出现假阳性结果而使灵敏度降低。新近发展的多色nSH同时使用5种荧光素标记探针，1次杂交即可分辨全部46条染色体，极大地提高了染色体核型分析的灵敏度和精确性；此病细胞的来源．进一步提高nSH检测的特异性和灵敏度。郑玲等㈦运用中期荧光原位杂交(M—FISH)对初治APL5例，复发APL3例。AML—M1和AML—M5各1例和10例治疗后获完遗传学和逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)结果相比较，认为其敏感性虽不如R’r-PCR，但由于它无假阳性，反映的是处于增殖期的单个白血病细胞的状况。通过反复检测可以动态地观察体内白血病细胞负荷的消长，似比RT—PCR更有预测白血病复发的价值。FCM通过检测在正常骨髓或外周血细胞上不表达或低表(LAIP)来定量MRD。LAIP有以下特点：抗原不同步表达，抗原交叉表达，抗原过表达，抗原缺失，抗原异位表达[3“。应用上述组合可以在完全缓解(CR)患者外周血或骨髓中检出少量白血病细胞。应用此法必须对患者初发时的表型特征有详尽的了解，以便选择适当的标志检测MRD。目前，使用这种方法可在约90％ALL(急性淋巴细胞白血病)和75％AML(急性髓系白血病)患者中进行MRD检测。流式细胞术检测优势：FCM是具有单克隆抗体、流体力学、免疫荧光、计算机等技术，通过测量射门参数在单细胞水平辨认细胞形态、大小和荧光特征，检测快速、简便，特异性好，敏感度高，能对大量细胞进行定量分析，使用的单克隆抗现代预防医学2008年第35卷第15期·3031·文章编号：1003—85cr7【2008)15—303l—03中圈分类号：R733一文献标识码：B疗方案．从而改善临床疗效。本文就对MRD检测方法及其临床应用进行综述。关键词：微小残留病；微小残留病检测；白血病0(IIlinimal平高的患者治疗强度不够，而MRD水平低甚至无MRD的患者接受了不必要的过度治疗而产生严重的毒副反应，这都不利改善临床疗效。本文就对MRD的检测方法及MRD检测的临MRD检测的方法1．1免疫组化方法(1)结果重复性差；(3)内源性的造血干细胞的碱性磷酸酶和过氧化物酶会使本底染色过重，妨碍肿瘤染色的观察。(4)可与造血干细胞的非肿瘤抗原引起交叉反应，导致假阳性结果；1．2细胞遗传学方法染色体核型分析测MRD的核型标志。检出异常核型细胞的患者。绝大多数形出核型异常细胞，包括