应用RAPD技术构建绞股蓝DNA指纹图谱.pdf

第34卷第3期陕西师范大学学报(自然科学版)Vo1．34NO．3
2006年9月JournalofShaanxiNormalUniversity(NaturalScienceEdition)Sep。2006

文章编号：1672—4291(2006)03—0087—05
应用RAPD技术构建绞股蓝DNA指纹图谱

庞敏，邹芳平，肖娅萍
(陕西师范大学生命科学学院，陕西西安710062)

摘要：以不同类型绞股蓝(GynosternrnaPentaphyllum，(Thunb)Makino)DNA为模板，进行
RAPD反应条件的优化及RAPD结果分析．最终筛选的D反应条件为：2OLPCR反应体系中
包括了10Xbufer2．0tLL，Mg22．0mmol／L，TPO．2mmol／L，引物O．5mmol／L，Taq酶1u，
模板DNA50ng．反应程序为94℃3min一(94℃30s一38℃40s一72℃1min)45个循环一72℃10
mi4℃保持，并从66条随机引物中筛选出5条带型丰富、适合于绞股蓝分析的随机引物．以这5
条随机引物对不同类型绞股蓝进行RAPD扩增，识别其特征性多态位点，建立分子标记检索表．
关键词：绞股蓝；RAPD；DNA指纹图谱
中图分类号：Q949．782文献标识码：A

ConstructionOfDNAfingerprintfor
GynostemmaPentaphyllum(a~unb)MakinobasedonRAPDanalysis
PANGMin，ZOUFang-ping，XIA0Ya-ping
(CollegeofLifeScience，ShaanxiNormalUniversity，Xian710062，Shaanxi，China)
Abstract：TheoptimizedRAPDanalysiswithdiferentG抑￡溯撇PentaphyllumaStemplatesin

PCRampliticationWaSreportedinthispaper．Theoptionalparametersfor20t*LPCRreactionsystem
are10×buffer2．0tLL，Mg2mmol／L，dNTP0．2mmol／L，randomprimer0．5mmol／L，Taq
DNApolymerase1U，andtemplateDNA50ng，respectively．Theoptimizedprotocolforthereactionis
94℃(3min)—94℃(30s)—38℃(40s)—72℃(1min)45cycles---72℃(10rain)—4℃(constant
temperature)．The5primerswereselectedfrom66randomonestocarryoutthisRAPDamplification
SOthatthecharacteristicpolymorphoussitesofGynostemmaPentaphyllumarelocatedaswellasthe

identificationkeybasedonmolecularmarkersisestablished．
Keywords：os￡em仇口Pentaphyllum(Thunb)Makino；D；DNAfingerprint

绞股蓝(y，z￡聊zPentaphyllum，(Thunb)在长期的自然环境及人工栽培的条件下，逐渐形成
Makino)系葫芦科多年生攀缘草质藤本植物，全草了众多品种及栽培类型．目前，对绞股蓝的研究主要
入药．绞股蓝含80余种皂苷，其中多种与人参皂苷集中在栽培管理、化学成分、药理作用、皂甙提取工
相同，此外还富含黄酮类物质及人体所需要的多种艺的改善等方面。
’氨基酸、维生素、低聚糖、微量元素等，已证实其具有RAPD是众多分子标记中应用最广的一
降血脂、降血压、防抗癌、促睡眠、提高人体免疫力、种，4J，它具有快速简便，通用性好，对DNA的需求
调节人体生理机能等神奇的医疗保健作用⋯1．我国量小且质量要求不高等优点，在生物的遗传多样性
绞股蓝资源丰富，分布于秦岭及长江以南地区2，检测、品系鉴定、基因定位、遗传图谱构建和系统学

收稿日期：2005一io一15
基金项目：国家“十五”科技攻关项目(771148)
作者简介：庞敏，女，硕士研究生，主要从事绞股蓝种质资源方面的研究工作
*通讯作者：肖娅萍，女，教授，硕士研究生导师．

陕西师范大学学报(自然科学版)第34卷

研究1材料和方法
RAPD反应几个主要影响实验结果的因素进行了优。一一一
化，找到最佳反应体系及反应条件，试图在DNA水11实验材料
平上构建绞股蓝的分子标