阿司匹林抑制ErbB2诱导宫颈癌细胞凋亡.pdf

湖南师范大学

硕士学位论文

阿司匹林抑制ErbB2诱导宫颈癌细胞凋亡

姓名：孙振华

申请学位级别：硕士

专业：生物化学与分子生物学

指导教师：张健;周畅

20090501
摘要使用阿司匹林可以降低很多种类癌症的发病率，然而在宫颈癌中应用的却很少报道。．原癌基因ErbB2在宫颈癌中过表达，并且被认为是一个药物治疗靶点。在本文中，我们研究了阿司匹林是否对宫颈癌有治疗作用，并且研究了阿司匹林对ErbB2转录和翻译水平的影响。为了探讨阿司匹林在体外对宫颈癌细胞系HeLa凋亡和增殖的影响，我们利用Hoechst33258染色和AnnexinV_FITC／PI双染色流式细胞分析法检测细胞凋亡，利用MTT和克隆形成实验检测细胞增殖。HeLa细胞用阿司匹林处理后，我们发现细胞凋亡增加和细胞增殖被抑制。W-estemblot和免疫细胞化学实验表明阿司匹林抑制ErbB2表达是剂量和时间依赖性的，同时ErbB2的降解是通过蛋白酶体途径的。为了深入研究阿司匹林引起细胞凋亡的潜在机制，我们研究了阿司匹林对ErbB2下游细胞生存信号通路的影响，同时检测了对抗凋亡基因Bcl．2表达的影响。我们发现阿司匹林能够抑制ERK和AKT的活性，同时Bcl一2的表达也被抑制。这些实验结果表明阿司匹林诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖可能是通过抑制ErbB2下游的细胞存活信号通路起作用。总的来说，我们的实验揭示了一个阿司匹林抗癌作用的新机制，同时暗示阿司匹林可以作为治疗宫颈癌的候选药物。关键词：宫颈癌，阿司匹林，ErbB2，细胞凋亡，ERK，AKT，Bcl．2III
fIomationsignahegulated妯nase(ERK)method；MTTABSTRACTceⅣicalW色stemBcl一2．W色f．oundAKT’HoweVer’consideredta略et．InexaminedofaspirinefIfectsceninandV_FITC／PIincubatedwithImmunocytochemicaltimedependentwasproteosome—mediateddegradation如rthermechanisms，weinVestigatedthedownstreamsurviValinhibitedThesedatareVealceUTheisassociatedlowerriskmanytypes．therelittlereportsprotooncogeneErbB2oVerexpressedcerVicalcancer，andtherapeuticpresentstudy，wewhetherhadValueef．fectsampli6cationexpressionErbB2．T'oinVestigateapoptosisproliferationlineHeLaVitro，wetestedbyHochest3258stainingAnnexincloneassaywereuseddetectprolif．eration．Inductioninhibitioncellpr01iferationobserVedcellsaReraspirin．blotshowedthatinducedconcentrationreductiondueprotein．Tbunderlyingsignalingpathwaysanti—apoptosisgeneactiVationextracellularBcl一2expression．significantlyinducesinhibitstousecancerareonacancer．asV
Words：CerVicalcancer，Aspirin，ErbB2，Apoptosis，ERK，AKT，maybehumanaddition，moreresearchesKeyViainhibitingErbB2downstreamcellsurviValsignalingpathways．TheseresultspresenthereindicateaspirinnoVelgenetherapeuticagentforcervicalcancer．InneededelucidatetheclinicalpotentialofinBcl一2totreatnlentaareascancer．VI
十二触麟内DMS0：Dmt}1ylsul蹴de英文缩写表EIⅨ：eXⅡ孤ellularLB培养基si印m-regulated阿司匹林胞外信号调节激酶3一(4，5．二甲基噻唑．2)_2，5．二苯基四氮唑溴盐二甲基亚砜激活蛋白2牛血清白蛋白磷酸缓冲液大肠杆菌千道尔顿聚合酶链式反应氨苄青霉素二硫苏糖醇苯甲基磺