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浅谈植物组织培养及其应用 目前,生物技术正在世界突飞猛进地发展,而且在医学、农业、 食品工业、能源工业、环境保护各个领域显示出极大的生产潜力。作 为生物技术有力手段的组织培养,也日益受到重视,组织培养在农林 作物的脱毒快繁、突变诱发、细胞工程和基因工程等方面都可以发挥 作用. 当前人类正面临淡水资源短缺的困难,同时土地沙荒化、盐渍化 也对人类造成威胁.我国是属于淡水资源缺乏的国家,除积极进行节用 水,在农业上选育耐旱作物品种以及提高农作物的抗旱性之外,应用 细胞工程技术快速繁殖固沙植物,筛选抗旱和抗盐的细胞突变体,以 至利用基因工程方法将抗旱基因引入到禾谷类作物中,最终将会对干 旱、半干旱及滩涂地区的开发利用产生极大影响.可喜的是,目前科学 家们已做出积极努力,在渗透调节基因工程方面取得了有意义的进 展。 总之,生物技术的应用将对我国农林生产带来革命性的变化,本 节所讲的组织培养的基本原理及其应用,希望能引起读者广泛的兴 趣,以便为不久的将来应用生物技术在解决我国旱区的实际问题上, 能有所启迪。 一、植物组织培养中的细胞分化与器官建 (一)植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植 物的全套遗传基因,因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个 与母体一样的植株。这个概念虽然在本世纪初已经提出,但在当时的 技术条件下,在实践上并没做到,经过几十年来组织培养技术的不断改 进,目前细胞的全能性不但在理论上完全被证实,而且为组织培养在 实践上的应用奠定了基础。 植物细胞要表现出全能性,须经过几个步骤: 成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株。 成熟细胞→愈伤组织→出根出芽→完整植株。 脱分化也就是已经分化定型的细胞,经过诱导成为重新恢复了分 裂能力(也就是成为分生状态)细胞的过程。 不但植物体细胞可以表现全能性,花粉在培养条件下也可能进行 脱分化,通过愈伤组织或胚状体发育成单倍体植株. 植物细胞为什么表现出全能性呢?就要从动物与植物细胞的区 别说起。不论是植物、动物还是微生物,其代谢的分子基础基本是一 样的,从微生物到人,遗传的信息是一致的。但动物与植物细胞区别 还是很大的这差别主要地在于: 第一,自养与异养的差别。高等绿色植物是自养的,对营养的要求 较简单,因此培养基的成分大部分为无机物和少量简单有机物。而高 等动物是需要多种复杂营养的异养生物,它们从复杂的来源中吸收、 消化和同化其营养,并通过血液将养分输送到全身细胞和器官. 第二,外界环境的差别。动物细胞直接所处的内部环境,以上对 浓缩的形式来满足其营养要求.植物所处的环境变化大,它中收养分 是以稀释的状态。植物细胞束缚在纤维素壁内,内部液泡保持相当稳 定的成分。植物细胞又以很大的能力维持着大的液泡、原生质与外界 培养基进行物质交换. 第三,胚胎得到养分的方式不同。动物的胚靠预先存在卵里的营 养发育,靠胎座与母体联系,植物的胚获得营养方式相对地简单,胚 存在于胚囊和胚株中,通过胚乳供应胚的养分,原胚与子叶通过其外表 面吸收养分。所以植物细胞诱导成胚从外部取得营养容易,不象动物 要通过血液。 第四,器官发育的差别。动物很早就开始器官发育,这些器官有 高度特化的功能,然后靠血液循环系统、神经系统、脊髓、大脑、激 素把各器官连成整体。并且动物器官的发育过程基本上只有一次,而 高等植物重复地产生器官而且是无限的。植物器官的发育是在生长区 通过活细胞的活动,如顶端分生组织不断产生叶、芽、花,在这些具 有活细胞的部位,可取活细胞进行移植和培养。 诱导细胞的脱分化,需要许多外界条件。任何一个分化的细胞都 具有保持分生组织状态的潜势,不过它平常处于受抑制的状态,消除 抑制作用就可以使细胞恢复分裂。在各种外界条件中,外源激素对脱 分化起重要作用.有些植物的外植体仅需加入生长素(吲哚乙 酸”,NAA”萘乙酸”,2,4-D)即可诱导细胞的分裂与生长,如菊苣; 有的仅需加入加细胞激动素类,如大豆、萝卜;另一类需加生长素和 细胞激动素类,如烟草髓、胡萝卜、马铃薯;还有一类不需加任何激 素,如冠瘿组织,烟草肿瘤组织。 (二)组织的分化与器官建成 1、维管组织的分化 早期研究发现(Wetmore,1955),丁香的芽可以诱导邻近的组织 分化出维管束,后证明这是芽中IAA的作用。将一块含有14C-IAA 和蔗糖的琼胶楔形物插入到愈伤组织切口中,14C—IAA表明蔗糖和 IAA通过琼胶扩散到愈伤组织,从而在愈伤组织中造成这两种物质的 梯度,在楔形物一颇有同感形成维管束的瘤状物,瘤状物含有一形成 层带,一面形成韧皮部,一面形成木质部,与正常的维管束