益心解毒通络胶囊对糖尿病大鼠心肌的保护作用及分子机.pdf

益心解毒通络胶囊对糖尿病大鼠心肌的保护作用

及分子机制的研究

邓悦，朴春丽

长春中医药大学附属医院（130021）

【摘要】目的：研究糖尿病大鼠心肌组织结缔组织生长因子（CTGF）mRNA表达及中药益心解毒通

络胶囊的调节作用。方法：46只Wistar大鼠用链脲佐菌素诱发糖尿病后，随机分为DM组、苯那

普利治疗组和益心解毒通络胶囊治疗组，以正常10只大鼠作为对照。连续处理12周后，应用

RT-PCR检测心肌组织结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达水平。结果：DM大鼠结缔组织生长

因子（CTGF）mRNA表达增加，益心解毒通络胶囊治疗组CTGFmRNA低于DM组（P<0.05），结论：

益心解毒通络胶囊对DM心肌病变有保护作用，其机制可能是通过抑制CTGF途径，调控相关基因

表达，改善糖脂代谢，减少细胞外基质的积聚。

【关键词】糖尿病；结缔组织生长因子（CTGF）；益心解毒通络胶囊；细胞外基质

DCM是糖尿病一种常见的慢性并发症，是导致糖尿病患者晚期死亡的主要原因之一。其病理

改变以心肌细胞肥大、心肌间质纤维化和心肌微小血管广泛内膜病变等为主。DCM早期可无特殊

症状，心功能的测定以心室舒张功能减退为主，随着心肌病的进展，DCM晚期的临床表现与大多

数典型扩张型心肌病的表现相似，终末期心力衰竭为其引起死亡的主要原因。目前，尚缺乏有效

的治疗措施控制其发生发展，临床上现在对DCM治疗所使用的ACEI或AT1RA，虽其疗效肯定，

但由于ACEI会产生干咳、神经性水肿、肾小球滤过率下降等副作用，而AT1RA又有不能发挥缓

激肽的有益治疗作用，在逆转心室肥厚方面明显不如ACEI的缺陷，因此选择一个较理想的治疗

手段就显得尤为重要。中医药治疗DCM自古以来就有过类似记载，积累了一定的经验。

1材料与方法

1.1材料

链脲佐菌素（STZ）为美国Sigma公司产品，益心解毒通络胶囊由吉林省中医院制剂室提供，

兔抗大鼠1、III型胶原（Col1、III）多克隆抗体（即用型）、兔抗鼠MMP-1、TIMP-1多克隆抗

体（即用型）为福建迈新生物技术公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG、HIGH-SABC试剂盒

为武汉博士德公司产品，逆转录酶试剂盒由Invitrogen公司生产，Tag酶为北京鼎国生物技术发展

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中心产品，DNAMarker（DL-2000）由Takara公司提供。日立7150型全自动生化分析仪，UV755B

分光光度计，WhatmanPCR扩增仪及TanonGIS-1000凝胶图像处理系统。根据文献[1]合成CTGF

和β-actin两对寡核苷酸引物。CTGF引物序列：上游5′-CTAAGACCTGTGGAATGGGC-3′，下游

5′-CTCAAAGATGTCATTGCCCCC-3′用这对引物可扩增出长度为383bpCTGFcDNA片段；β-actin

引物序列：上游5′-GTGGGCCGCTCTAGGCACCAA-3′下游

5′-CTCTTTGATGTCACGCACGATTTC-3′用这对引物可扩增出长度为540bp的β-actincDNA片段。

1.2动物模型的建立及分组

Wistar大鼠46只，雌雄各半，体重180~210g，按性别、体重随机分为正常对照组（N组，

10只）；DM组（D组，12只）；DM+苯那普利治疗组（DB组，12只）；DM+益心解毒通络胶囊

治疗组（DY组，12只）。大鼠DM模型的制备：单次腹腔注射STZ50mg/kg（临用前用0.1mol/L

枸橼酸缓冲液溶解，pH4.2），正常对照组仅腹腔注射等体积生理盐水。注射STZ72h后，尾静脉

采血测空腹血糖并同时测尿糖，血糖≥16.7mmol/L，尿糖+++以上者列入DM观察对象。

1.3给药及标本采集

造模7天后，DB组灌服苯那普利10mg·kg-1·d-1，DY组灌服益心解毒通络胶囊3g﹒kg﹣1﹒d﹣

1，N组和D组每日上午灌服等体积自来水。12周末将大鼠乙醚麻醉下眶后静脉采血，2000rpm

离心10分钟后，分离血清，留取标本。打开腹腔，快速切除心脏，滤纸吸干，去掉包膜，称重。

部分心肌组织立即置入10%中性福尔马林液固定，用于光学显微镜标本和免疫组化标本的制备。

剩余部分液氮冷冻，－74℃冰箱里冻存备用。

1.4测定方法

1.4.1一般项目：（1）血糖：葡萄糖氧化酶法，采用长春汇力生物工程技术开发中心的试剂盒。

（2）血脂：用日立7150型全自动生化分析仪测定。

1.4.2心肌组织胶原、基质金属蛋白酶（MMP-1）及其抑制物（TIMP-1）检测：采用SABC法，

以PBS代替一抗作为阴性对照染色（Ⅰ、Ⅲ型胶原）,具体步骤略；采