褐藻多糖对糖尿病小鼠血糖影响的研究.doc

褐藻多糖对糖尿病小鼠血糖影响的研究
前言
随着生活水平的提高，糖尿病(diabetesmellitus)的发病率持续上升，已成为继心脑血管疾病、癌症之后危害人类身体健康的第三大致残和致死性疾病。糖尿病是由血糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱引起的慢性病。一般认为糖尿病与遗传、环境、病毒感染、肥胖、种族、营养物质代谢失衡以及内分泌失调等因素有关。可分为Ⅰ型，IDDM-胰岛素依赖性糖尿病和Ⅱ型，NIDDM-非胰岛素依赖性糖尿病、其它特殊类型和妊娠期糖尿病四类。Ⅰ型糖尿病患者体内胰岛β细胞破坏，导致胰岛素分泌绝对不足，为儿童及青少年最常见的内分泌疾病。Ⅱ型糖尿病则是源于β细胞功能低下，胰岛素相对缺乏与胰岛素抵抗(IR)。糖尿病临床表现为血糖水平升高，引起糖代谢紊乱，继发蛋白和脂肪代谢紊乱，同时导致心脑血管疾病、肾功能衰退及视网膜病变。
目前，临床上糖尿病的主要治疗手段是注射胰岛素和口服降血糖药，然而长期注射胰岛素、使用口服降血糖药可以引起胰岛素依赖性和苏木杰效应。研究表明，中药在糖尿病及其并发症的治疗方面取得了较大进展，因此，在中药中寻找合适的降血糖药物已经成为降糖药物研究的新的方向。
多糖作为中药降糖的主要活性成分，其在治疗糖尿病及其并发症方面的作用得到了广泛的研究，研究表明，多糖主要通过以下几个方面调节血糖：通过其受体调节糖代谢激素水平和酶的活性、通过抗氧化作用和提高机体免疫力等途径，增加糖利用，抑制糖异生，达到改善糖代谢紊乱和胰岛素抵抗的作用。多糖已越来越受到人们的关注，有学者预言21世纪前几十年将是“多糖时代”，有研究表明褐藻多糖具有很好的清除氧自由基的作用，反映了其具有抗氧化作用[1]。
本文研究了褐藻多糖对正常小鼠和以STZ诱导的糖尿病小鼠模型的影响，检测其血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等指标，观察褐藻多糖降血糖作用及其对糖尿病小鼠血脂代谢的影响，为其进一步开发利用提供理论依据。

材料与方法
一、动物来源：昆明种小鼠，雌雄各半，18～22g，由北京军事医学科学院动物实验中心提供，合格证编号：0029535
二、主要的试剂与仪器设备
1.主要试剂：
褐藻多糖：由中国科学院金属研究所提供；
盐酸二甲双胍：天津太平洋制药有限公司产品；
链脲佐菌素：为Sigma公司产品；
葡萄糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)试剂盒：均为长春汇力生物技术有限公司产品。
2．主要试剂的配制:
⑴四氧嘧啶的配制：将ALX用生理盐水溶解稀释为10%的浓度用直径22um的滤菌器过滤。
⑵链脲佐菌素的配制：
①先配制A液：0.1mol/L柠檬酸水溶液：柠檬酸晶体（C6H8O7*H2O）2.10g加蒸馏水至100ml。
②再配制B液：0.1mol/L柠檬酸三钠水溶液：柠檬酸三钠晶体（C6H5O7Na3*2H2O）2.94g加蒸馏水至100ml。
③按A液28.0ml、B液22.0ml的比例扩大倍数混合后，即可得到所需0.1mol/L、pH4.4的柠檬酸缓冲液液体总量，必要时高温高压消毒，4℃冰箱保存备用。
3.主要的仪器和设备
TU-1810紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；
BS-124S电子天平，德国塞多利斯股份公司；
TGL-16G-A离心机，上海安亭科学仪器厂；
HPX-9052MBE电热恒温箱，上海博迅实业有限公司；
F6/10超细匀浆机，上海弗鲁克流体机械制造有限公司；
4.实验方法：
⑴褐藻多糖对正常小鼠的影响：
取小鼠20只，随机分为正常对照组和褐藻多糖组。褐藻多糖组每天分别给予500mg/kg的褐藻多糖，正常组每天给予同体积蒸馏水，第14天眼眶后静脉丛取血，分离血清，测定血糖，取血前一晚禁食不禁水。
⑵褐藻多糖对STZ致实验性糖尿病小鼠的作用：
①造模方法：取小鼠30只，分为正常组、STZ组和ALX组，适应性喂养一天后禁食12h，ALX组一次性腹腔注射ALX200mg/kg，STZ组一次性腹腔注射STZ50mg/kg，正常组给予生理盐水。1周后，眼眶后静脉丛取血，分离血清，测小鼠空腹血糖。比较两种方法，择优选择STZ组，取血糖值≥11.1mmol/L的作为糖尿病模型。
②实验方法：取成模小鼠30只，按血糖值的高低随机分组，分为模型组、褐藻多糖组和阳性药物对照组，另取正常小鼠10只，作为空白组。各组小鼠每天早九点灌胃治疗，褐藻多糖组灌胃剂量为500mg/kg，二甲双胍灌胃剂量为160mg/kg,模型组和空白组给予相应体积的蒸馏水。连续灌胃治疗32天，于第8、21、32天小鼠禁食不禁水12h，眼眶取血，分离血清检测小鼠空腹血糖、血清TG、TC值。
③统计学处理：统计学方法采用SPSS统计软件，各组数据均用x±s表示,组间比较用方差分析。
实验结果
1.褐藻多糖对正常小鼠血糖的影响：
连续灌胃给药7天，褐藻多