实验性糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子和转化生ひ蜃.pdf

河北医科大学

硕士学位论文

实验性糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子和转化生长因子
β<,1>的表达及罗格列酮的干预作用

姓名：刘珊

申请学位级别：硕士

专业：内科学

指导教师：王战建

20070301
实验性糖尿病大鼠肾脏色素上皮衍生因子和转化生长因子13，的表达及罗格列酮的干预作用摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病(diabetesmellitus，DM)重要的慢性微血管并发症之一，以肾小球基底膜增厚、系膜扩张以及胞外基质(ExtraceilularMatrix，ECM)增生为病理特征，导致。肾小球的高滤过和蛋白尿，是引起终末期肾衰的重要原因。肾小球实质细胞，尤其是系膜细胞可分泌和表达多种细胞因子，其中转化生长因子factor,TGF)．13l和血管内皮生长因子factor,VEGF)是早期DN发生的关键因子。TGF．13。是ECM的调节剂，其过度表达可导致ECM积聚；刺激足突细胞分泌VEGF。色素上皮衍生因子factor,PEDF)属丝氨酸蛋白酶抑制剂家族，最早由胎儿视网膜色素上皮细胞的培养液中分离出来，是最有效的新生血管抑制剂。PEDF和VEGF的平衡表达是维持眼内血管系统稳态的重要因素。PEDF与体内多个器官功能有关，最近国外一项研究显示，DM大鼠。肾脏的皮质和髓质中PEDF都显著下降，肾小球系膜细胞培养显示PEDF可显著下调TGF．13。的表达，可见其是一种与DN发生密切相关的因子。罗格列酮是噻唑烷二酮类(TzDs)药物中的一种，它通过减轻胰岛素抵抗，增强胰岛素敏感性来降低血糖；改善。肾小球高滤过状态，调节系膜细胞及’肾小管上皮细胞增殖、分化，减少炎症因子产生，纠正脂代谢紊乱，中文摘要(transforminggrowth(pigment(vascularendothelialepithelium．dedved
从而发挥肾脏保护作用。除上述作用外，它还有血管保护和抗炎作用。多项国内外临床及基础实验均显示，TZDs可下调肾脏TGF．Dl水平，还可以减少VEGF的表达并呈剂量依赖性，这就是其抗炎和血管保护作用的具体体现。由于PEDF在DM大鼠肾脏的异常表达及其在眼部疾病中与VEGF的密切关系，还有最新发现的其抑制TGF．13。表达的作用，推测罗格列酮可通过上调PEDF水平来抑制VEGF和TGF—Bl的表达，从而改善肾小球高滤过状态，减少ECM堆积，对DM大鼠的。|!子脏起到保护作用。因此，本研究通过腹腔～次性注射大剂量链腮佐菌素(streptozotocin，STZ)的方法，建立l型糖尿病大鼠模型，该模型与人类l型DM的病理过程和代谢特点相似，并给予干预组罗格列酮治疗，在此基础上观察PEDF和TGF．B，在正常大鼠与糖尿病大鼠肾脏表达的变化及罗格列酮的干预作用，从而进一步研究糖尿病肾病的发病机制和罗格列酮对糖尿病的肾脏保护作用。方法：l选择雄性SD大鼠42只，给予标准大鼠饲料适应性喂养l周后，从中随机抽取14只作为正常对照组(NC组)，其余作为模型组(MO组)。后者给予腹腔一次性注射大剂量链脲佐菌素(STZ，55mg／kg)，破坏胰岛B细胞，建立l型糖尿病模型。于注射STZ后72h，选择空腹血糖(FBG)大于16．7mmol／L者作为l型糖尿病大鼠模型。再把成模大鼠随机分为糖尿病对照组(DM组)、糖尿病罗格列酮干预组(RSG组)。RSG组于成模后第2天开始给予罗格列酮钠(5mg／kg．d)混悬液灌胃，另外两组予以等体积生理盐水灌胃。实验全程共持续12周，于造模前、造模72小时及实验结束中文摘要
前尾静脉取血测空腹血糖(FBG)；实验结束前测体重，并用代谢笼收集24小时尿液，放射免疫分析法测定24小时尿白蛋白排泄量(UAE)；于第12周末，股动脉放血处死动物，收集血液，测定血清甘油三酯(TTG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白．胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白．胆固醇(VLDL．C)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)；酶联免疫分析法测定血清PEDF的浓度；摘取双侧肾脏称重，分别进行病理学HE染色观察肾脏形态学变化，免疫荧光染色观察PEDF和TGF．13，的表达部位及强度：免疫组化的方法检测肾脏PEDF和TGF—B1的蛋白表达情况及表达部位；Westem印迹，分析PEDF和TGF～131在糖尿病大鼠、罗格列酮干预组和正常大鼠肾脏皮质的表达水平。2统计学分析：所有资料以SPSSl2．0统计软件进行分析，首先用描述性统计和分析研究变量分布，符合正态分布的测定值以(i士s)表示，两组问的比较采用t检验，多组间的比较采用方差分析。结果：1．DM组和RSG组大鼠造模72小时后，其FBG较NC组升高，差异有显著性(P<O．01)。