一种发酵工艺制备的溶菌酶饲料添加剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113180159A(43)申请公布日2021.07.30(21)申请号202110611966.9A23K20/189(2016.01)(22)申请日2017.04.14A23K10/30(2016.01)A61K38/47(2006.01)(62)分案原申请数据A61K36/71(2006.01)201710243612.72017.04.14A61P1/12(2006.01)(71)申请人浙江伊杰斯生物科技有限公司C12N9/36(2006.01)地址322200浙江省金华市浦江县亚太大C12R1/545(2006.01)道677号(72)发明人潘宏涛卢亚萍(74)专利代理机构北京天盾知识产权代理有限公司11421代理人宋凌林(51)Int.Cl.A23K50/30(2016.01)A23K50/60(2016.01)A23K10/12(2016.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种发酵工艺制备的溶菌酶饲料添加剂(57)摘要本发明涉及一种包含溶菌酶的饲料添加剂，其中所述溶菌酶采用发酵工艺制备，具体步骤如下：取液体培养基置于三角瓶中，按4％v/v的接种量接入灰色链霉菌的菌体种子，进行摇瓶发酵，发酵条件为20‑40℃，150‑300r/min，发酵培养24h后，将发酵液离心去除菌体，取上清液依次用硫酸铵盐析法、凝胶柱层析法和阳离子交换柱层析法纯化后，冷冻干燥即得。使用上述发酵工艺获得的溶菌酶饲料添加剂对仔猪腹泻具有良好的防治效果，配合中药提取物使用效果更佳。CN113180159ACN113180159A权利要求书1/1页1.一种包含溶菌酶的饲料添加剂，其特征在于，所述溶菌酶采用发酵工艺制备，具体步骤如下：取液体培养基置于三角瓶中，按4％v/v的接种量接入灰色链霉菌的菌体种子，进行摇瓶发酵，发酵条件为20‑40℃，150‑300r/min，发酵培养24h后，将发酵液离心去除菌体，取上清液依次用硫酸铵盐析法、凝胶柱层析法和阳离子交换柱层析法纯化后，冷冻干燥即得。2.根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，所述液体培养基包含葡萄糖和蛋白胨。3.根据权利要求2所述的饲料添加剂，其特征在于，所述葡萄糖的浓度为10g/L，所述蛋白胨的浓度为5g/L。4.根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，所述灰色链霉菌选自灰色链霉菌S‑35。5.根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，所述发酵条件为30℃，200r/min。6.根据权利要求1‑5任一项所述的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂还包括中药提取物。7.根据权利要求6所述的饲料添加剂，其特征在于，所述中药提取物为白头翁提取物。8.根据权利要求7所述的饲料添加剂，其特征在于，所述白头翁提取物的提取方法如下：将白头翁用5‑20倍量水加热煮沸，沸腾后改文火再煮0.5‑2小时，倒出药液后加2‑5倍量水煎煮，重复1‑3次，每次各0.5‑2小时；合并药液后浓缩，静置过夜，以2500r/分钟的转速离心10分钟得上清液；取上清液用喷雾干燥机制成干粉，即得。9.根据权利要求8所述的饲料添加剂，其特征自在于，所述溶菌酶与所述白头翁提取物的重量比为1:1。10.权利要求1‑9任一项所述的饲料添加剂在制备防治仔猪腹泻的药物中的应用。2CN113180159A说明书1/5页一种发酵工艺制备的溶菌酶饲料添加剂技术领域[0001]本发明涉及饲料领域，具体涉及一种包含溶菌酶的饲料添加剂。背景技术[0002]近年来，随着畜牧产业的高度集约化生产，畜禽疾病的发生也日趋上升，由于疾病造成的死亡率逐年增加，给畜牧业造成重大的经济损失。腹泻是影响仔猪成活率和生长发育的主要因素之一，传统预防和治疗措施是使用抗生素。虽然抗生素在畜禽饲料中的使用对于有效控制疾病、提高饲料转化率、保障畜产品的稳定供应发挥了重要作用，但是由于饲料生产中抗生素的超范围、高剂量或多品种、低剂量的长期使用，以及养殖过程中抗生素滥用和乱用，带来的细菌耐药性问题显得尤为突出。随着欧盟2006年全面禁止在饲料中使用抗生素和美国公告2017年1月1日全面禁止在饲料中使用抗生素后，抗生素替代物研发一直是动物营养研究的热点。[0003]溶菌酶(Lysozyme)，又称细胞壁水解酶，能专一性地作用于细菌细胞壁肽聚糖分子，能使N‑乙酰胞壁酸与乙酰葡萄糖氨之间的β‑1,4糖苷键断裂，使细菌细胞壁变得松驰而达到溶解细菌的效果。溶菌酶广泛分布于高等动植物组织及其分泌物、原生动物、昆虫、植物以及各种微生物中。[0004]溶菌酶作为人体正常体液及组织中的非特异免疫因子之一，具有多种药理作用，参与机体多种免疫反应，有抗菌、抗病毒的功效，在机体正常防御功能和非特异免疫中，具有保持机体