一种RNA酶解液的预处理方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113528598A(43)申请公布日2021.10.22(21)申请号202110815236.0(22)申请日2021.07.19(71)申请人南通秋之友生物科技有限公司地址226000江苏省南通市启东市滨海工业园黄海路(72)发明人陈修足徐浩邱蔚然武琳陈红燕(74)专利代理机构深圳市宾亚知识产权代理有限公司44459代理人毋军(51)Int.Cl.C12P19/30(2006.01)C12P19/32(2006.01)C07H21/02(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种RNA酶解液的预处理方法(57)摘要本发明公开一种RNA酶解液的预处理方法，包括：RNA溶解液：总体积6L，其中RNA用量2％，固体酶用量5％和硫酸锌用量0.5％；RNA反应：分别取两组3L的RNA溶解液，再分别进行RNA反应，反应温度为70‑72℃，反应时间3h，然后在反应时间2.5h和3h取样，并进行HPLC检测反应转化率；RNA上样：超滤液和RNA反应液分别上样，漏出浓度C≥0.4g/L，上样液浓度和漏出液浓度的比值2≥1，判定为上样漏穿，记录上样量和上样体积。本发明通过板框过滤、微滤、超滤、阳树脂等一系列预处理组合，可以去除RNA和酶等原料中含有的大分子蛋白质、颗粒杂质、色素、可溶性蛋白质、钙、镁、锌离子等杂质，减少吸附到阴离子交换树脂上的杂质，有效保护了阴离子交换树脂，从而延长了阴离子交换树脂的寿命。CN113528598ACN113528598A权利要求书1/1页1.一种RNA酶解液的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、RNA溶解液：总体积6L，其中RNA用量2％，固体酶用量5％和硫酸锌用量0.5％；S2、RNA反应：分别取两组3L的RNA溶解液，再分别进行RNA反应，反应温度为70‑72℃，反应时间3h，然后在反应时间2.5h和3h取样，并进行HPLC检测反应转化率；S3、RNA反应液预处理：1)板框过滤：将其中一组3L的RNA溶解液通过硅藻土过滤，得到过滤液；2)微滤：将板框过滤液通过0.25um或0.5um微滤膜进行微滤，得到滤液；3)超滤：滤液进超滤机，设定超滤机的膜分子量分别为3000、6000、10000、20000，泵压力为0.2‑0.6Mpa进行超滤，且每个膜分子量分别超滤20‑50min，同时在超滤时间范围内多次随机取样超滤液和排废液；4)检测：检测过滤液、超滤液和排废液的紫外吸收波长A250、A260、A280、A430，并计算浓度C；5)阳树脂：超滤液经过阳离子交换树脂，通过流速SV1；S4、RNA上样：将超滤液和RNA反应液分别上样，漏出浓度C≥0.4g/L，且上样液浓度和漏出液浓度的比值2≥1，判定为上样漏穿，记录上样量和上样体积。2.根据权利要求1所述的RNA酶解液的预处理方法，其特征在于：所述微滤的孔径为0.25um或0.5um微滤。3.根据权利要求1所述的RNA酶解液的预处理方法，其特征在于：所述超滤的流量为100‑200ml/min。2CN113528598A说明书1/5页一种RNA酶解液的预处理方法技术领域[0001]本发明涉及核苷酸产品技术领域，具体涉及一种RNA酶解液的预处理方法。背景技术[0002]将核糖核酸(RNA)通过核酸酶P1或磷酸二酯酶酶解反应，再经过阴离子交换树脂层析分离再分别浓缩、结晶、干燥，可以制得腺苷酸(AMP)、鸟苷酸(GMP)、胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)等4种单一核苷酸产品。[0003]在应用阴离子交换树脂层析分离时，由于RNA和酶等含有色素、蛋白质等杂质，会使树脂色泽变深，交换性能降低。一般树脂在使用10批后，会使原来浅黄色的树脂变成褐色，上样交换核苷酸容量下降10％；树脂在使用20批后，树脂变成深褐色，上样交换核苷酸容量下降20％；树脂在使用30批后，树脂成为黑褐色，上样交换核苷酸容量下降30％以上。并且分离效果越来越差。如不采取措施，必须更换新树脂。发明内容[0004]本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种RNA酶解液的预处理方法。[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种RNA酶解液的预处理方法，其创新点在于，包括以下步骤：[0006]S1、RNA溶解液：总体积6L，其中RNA用量2％，固体酶用量5％和硫酸锌用量0.5％；[0007]S2、RNA反应：分别取两组3L的RNA溶解液，再分别进行RNA反应，反应温度为70‑72℃，反应时间3h，然后在反应时间2.5h和3h取样，并进行HPLC检测反应转化率；[0008]S3、RNA反应液预处理：[0009]1)板框过滤：将其中一组3L的RNA溶