一种新冠病毒检测用单抗.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113754761A(43)申请公布日2021.12.07(21)申请号202111049573.X(22)申请日2021.09.08(71)申请人苏州博特龙免疫技术有限公司地址215000江苏省苏州市漕湖街道观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810室(72)发明人刘立成吴刚闫广为张治业(74)专利代理机构北京中政联科专利代理事务所(普通合伙)11489代理人何磊(51)Int.Cl.C07K16/10(2006.01)C12N5/20(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书3页说明书12页附图4页(54)发明名称一种新冠病毒检测用单抗(57)摘要本发明公开了一种新冠病毒检测用单抗，所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1‑3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5‑1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1‑3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1‑3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5‑1.5mg，新冠病毒检测用单抗的制备方法，包括如下步骤：S1、订购小鼠，S2、小鼠免疫程序，S3、融合，S4、融合检测，S5、单克隆；本发明提供的一种新冠病毒检测用单抗，可以有效对新冠病毒进行检测，解决了核酸检测容易出现漏诊的问题，当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测增加进去，可作为核酸诊断的补充手段，极大提高了新冠病毒检测的准确性。CN113754761ACN113754761A权利要求书1/3页1.一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1‑3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5‑1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1‑3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1‑3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5‑1.5mg。2.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体3mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体3mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体3mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1.5mg。3.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体2mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体1mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体2mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体2mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体1mg。4.根据权利要求1所述的一种新冠病毒检测用单抗，其特征在于：所述新冠病毒检测用单抗的配方如下：以重量计：制备腹水，proteinG纯化的抗体1mg；制备腹水，抗原亲和纯化的抗体0.5mg；制备腹水，硫酸铵沉淀纯化抗体1mg；细胞上清扩大培养，proteinG纯化的抗体1mg；细胞上清扩大培养，抗原亲和纯化的抗体0.5mg。5.根据权利要求1至4任意一项所述的新冠病毒检测用单抗的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、订购小鼠；S2、小鼠免疫程序：注射两次抗原，并采用ELISA方法检测小鼠血清效价；S3、融合：培养细胞，第8天半量换液HT培养基，第10天后显微镜下画单克隆；S4、融合检测：对免疫小鼠的血清做阳性对照，并使用酶标仪测定450nm/620nm处OD值；S5、单克隆：选取20株阳性母细胞培养传代三次，选取OD值较大的细胞株制备抗体。6.根据权利要求5所述的一种新冠病毒检测用单抗的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中免疫程序方案包括以下步骤：S201、抗原配制方法：按照每只小鼠免疫约20ug，将抗原与QuickAntibody‑Mouse5W等体积混合；S202、免疫前采集空白血清，小鼠通过剪脚指标记，抓住小鼠颈部皮肤将小鼠腹部朝上，剪右前趾为1号，左前趾为2号，右后趾为3号，左后趾为4号，5号为未剪脚趾，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血用于分离血清，约3～5ul，手写标记，‑20℃保存；S203、初次免疫第0天：10‑20ug蛋白抗原与QuickAntibody‑Mouse5W等体积混合，充分混匀后在小鼠后腿部肌肉注射，在初次免疫前应采集空白血清；S204、第二次免疫第21天：等同初次免疫；S205、效价检测第35天：采用ELISA方法检测小鼠血清效价，采用断趾标记法标记小鼠，将小鼠固定于固定器内，用眼科剪在小鼠尾尖处剪断用EP管收取约20ul血并分离血清用于检测ELISA效