变性梯度凝胶电泳.doc

变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm）。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度50~60℃，变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。因此，DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/experiment/430/465/477/31629.htm"\t"_blank"详细
实验方法
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/experiment/94.htm"变性梯度凝胶电泳(DGGE)
实验材料
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/product/DNA%E6%A0%B7%E5%93%81"\t"_blank"DNA样品
试剂、试剂盒
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/reagent/%E5%B0%BF%E7%B4%A0"\t"_blank"尿素
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/reagent/%E5%8E%BB%E7%A6%BB%E5%AD%90%E7%94%B2%E9%85%B0%E8%83%BA"\t"_blank"去离子甲酰胺
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/reagent/%E4%B8%99%E7%83%AF%E9%85%B0%E8%83%BA"\t"_blank"丙烯酰胺
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/reagent/%E7%94%B2%E5%8F%89%E5%8F%8C%E4%B8%99%E7%83%AF%E9%85%B0%E8%83%BA"\t"_blank"甲叉双丙烯酰胺
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/reagent/%E7%90%BC%E8%84%82%E7%B3%96%C2%A0"\t"_blank"琼脂糖
仪器、耗材
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/PCR%E6%89%A9%E5%A2%9E%E4%BB%AA"\t"_blank"PCR扩增仪
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E5%8F%98%E6%80%A7%E6%A2%AF%E5%BA%A6%E5%87%9D%E8%83%B6%E7%94%B5%E6%B3%B3%E4%BB%AA"\t"_blank"变性梯度凝胶电泳仪
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E5%87%9D%E8%83%B6%E6%88%90%E5%83%8F%E5%8F%8A%E5%88%86%E6%9E%90%E7%B3%BB%E7%BB%9F"\t"_blank"凝胶成像及分析系统
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E7%B4%AB%E5%A4%96%E9%80%8F%E5%B0%84%E4%BB%AA"\t"_blank"紫外透射仪
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E9%AB%98%E9%80%9F%E7%A6%BB%E5%BF%83%E6%9C%BA"\t"_blank"高速离心机
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E7%94%B5%E6%B3%B3%E4%BB%AA"\t"_blank"电泳仪
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E7%94%B5%E6%B3%B3%E6%A7%BD"\t"_blank"电泳槽
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/equipment/%E5%BE%AE%E9%87%8F%E5%8A%A0%E6%A0%B7%E5%99%A8"\t"_blank"微量加样器
HYPERLINK"http://www.b