口腔上皮细胞的显微镜观察.ppt

实验六细胞核和线粒体的荧光观察一、实验目的二、实验原理
细胞参量Hoechst33342和Rhodamine123
Ho.33342是一种亲脂性物质，能与DNA特异性结合的荧光探针，所以被大量用于活细胞的观察和定量的研究。荧光激发和发射特性分别为350nm和461nm。
罗丹明123是一种亲脂性的阳离子荧光探针。用它来标记线粒体是由于线粒体的基质对于膜间隙具有负电荷，而罗丹明123具有正电荷，二者电性相吸。所以能较好地观察线粒体的形态变化。荧光激发和发射特性为507nm和529nm。

三、仪器、材料与试剂四、实验步骤
1.将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上
2.配制Ho.33342和罗丹明123工作液:Ho.33342(10μg/mL),罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液，pH7.4）
3.将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次
4.在parafilm膜上分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作液各10L，将盖玻片上的细胞倒扣在parafilm膜上室温暗处孵育10min。
5.在parafilm膜上加PBS缓冲液，待盖玻片被冲起后，再轻轻揭下盖玻片,用PBS缓冲液轻轻漂洗2次。
6.利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体。配制Ho.33342和罗丹明123工作液:
Ho.33342(10μg/mL),罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液，pH7.4）思考题