有机染料的吸附柱色谱.ppt

有机染料吸附柱色谱一、实验目的吸附柱色谱是利用装在柱中的经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等，在色谱分离中称固定相）对待分离混合物中各组分的吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同进行分离的。当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂，称流动相）洗脱。由于不同化合物极性不同，被吸附能力不同，随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带。经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随洗脱剂首先流出，再继续加洗脱剂可将各组分依次全部从柱中洗脱出来，分别收集各组分。测量有色组分的吸光度即可计算回收率。柱色谱分离示意图色谱分离效果与固定相的颗粒直径大小、含水量有关，也与流动相和被分离物质的极性的极性。被分离物质的极性、吸附剂的活性和洗脱的极性之间的关系如图所示。活性等级色谱柱可有干法和湿法两种装柱方法。
干法装柱的方法是：在干净的色谱柱底部塞少量脱脂棉
（或玻璃棉）使平整，再放一片与柱内径相当的滤纸，关闭
活塞，从干漏斗分批加入固定相（载体），边装边轻轻敲击
柱子，使装填紧密均匀并到适宜高度，再在柱顶部放上2片
与柱内径相当的滤纸，打开活塞，加入适宜溶剂润湿柱身。
湿法装柱的方法是：在干净的色谱柱底部塞少量脱脂棉
（或玻璃棉）使平整，再放一片与柱内径相当的滤纸，关闭
活塞，加入适宜溶剂至柱高度的一半，将调成悬浊液的固定
相不断慢慢地倒入柱内，同时需打开活塞，使溶剂慢慢流出
（液体下滴速度为每秒1滴），直到固定相的沉降不再变动
为止，然后在柱顶部放上2片与柱内径相当的滤纸。仪器：
具塞色谱柱(10cm×1cm)1支，容量瓶(25mL)3个，烧杯
(50mL)1个，吸量管(1mL)1支，玻璃棒1根，滴定台带滴定管
夹，滴管1个，小漏斗1个，722光栅型分光光度计，小剪刀
(共用)。

试剂：
色谱用中性氧化铝，95％乙醇，0.1mol·L-1HCl溶液,0.1g·L-1甲基橙和0.1g·L-1亚甲基兰乙醇溶液(H2O∶95％乙
醇=1∶1)。

材料：
脱脂棉，擦镜纸，滤纸片。四、实验步骤2、洗脱分离
当柱中流动相下降到滤纸片
上端1mm时，立即小心地滴加入
吸量管中的0.50mL有机染料混合
溶液，待混合溶液液面下降到将
与滤纸片相平时，用少量95％乙
醇将色谱柱内壁沾附的混合溶液
淋洗入柱内，然后少量多次地加
入95％乙醇洗脱，用25mL容量瓶
接收第一种染料洗脱分离液；再
改用0.1mol·L-1HCl溶液继续洗
脱，用另一个25mL容量瓶接受第
二种染料洗脱分离液。3、回收率测定
将分离出的亚甲基蓝溶液用95％乙醇定容，甲
基橙溶液用0.1mol·L-1HCl溶液定容，分别以蒸馏水
为参比，在450nm处测定甲基橙溶液的吸光度A1，
在661nm处测定亚甲基兰溶液的吸光度A2。
准确移取0.50mL有机染料混合溶液于25mL容
量瓶，用0.1mol·L-1HCl溶液定容，分别测定在450
nm和661nm处的吸光度A1′和A2′，按η1=A1/A1′
和η2=A2/A2′计算各组分的回收率。五、实验关键操作注意事项七、思考题八、作业