柱色谱法分离.ppt

实验十、柱色谱法分离柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。吸附柱色谱常用氧化铝和硅胶作固定相。在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等，一般要经过纯化和活性处理。颗粒大小均匀，粒小，表面积大吸附能力就高，但过小，溶剂流速太慢。氧化铝有：酸性PH为4，中性PH=7.5，碱性PH=10，3种，大多数吸附剂都能强烈吸水，使活性降低，通常用加热方法使吸附剂活化。活性等级可用勃劳克曼标准测定法，分五级。I级活性最高，V级吸附力最弱。色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。所用溶剂必须纯粹、干燥。吸附剂用量为被分离样品量的30~40倍，需要时可增至100倍。柱高与直径之比是75：1。（利用相似相溶原理）
本实验采用干法装柱。
一、实验目的三、装置图四、操作规程8五、操作要点4、在整个洗脱过程中，为了保持色谱柱的均一性，应使柱中洗脱剂液面始终保持不低于石英砂面。否则柱中溶剂流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。
5、最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。
6、可以每次倒入10ml洗脱剂进行洗脱。