红细胞免疫功能测定方法.ppt

红细胞免疫功能及其测定方法在肿瘤的发生发展过程中免疫功能起着重要的作用，过去的观点认为免疫功能主要和白细胞有关，而红细胞在其中所起的作用一直未受重视。1981年siegel提出了红细胞免疫系统的新概念，开辟了机体免疫功能研究的新纪元。红细胞作为人体血液有形成份的主要组成部分与肿瘤细胞的接触机会比其他细胞要大1000倍。红细胞可以通过促吞噬作用、清除循环免疫复合物(CIC)、效应细胞样作用及对淋巴细胞和细胞因子的调控作用来达到抑制肿瘤的生长和转移的作用。在正常情况下，红细胞免疫和白细胞免疫(如T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞)在机体内相互联系、密切配合、协同作战，识别和清除肿瘤细胞，共同维持机体内环境的平衡和生物功能的稳定。
1红细胞与其它免疫反应细胞的比较2红细胞的免疫功能粘附的复合物较悬浮于血浆中游离的复合物更易被吞噬。某些病毒在体内也能粘附于红细胞，从而被吞噬消灭。免疫粘附可以增强吞噬作用4～5倍。红细胞还能阻止癌细胞在循环中播散，因在外周血中癌细胞遇到红细胞比遇到白细胞的机会多500～1000倍。当癌细胞表面结合有抗体与补体时，则可通过红细胞表面的C3b受体，使癌细胞粘附于红细胞，故容易被吞噬细胞捕捉与吞噬，从而防止癌细胞的转移与扩散。

红细胞还有吞噬细胞样的功能，因为在其细胞膜表面具有过氧化物酶，该酶是典型的溶酶体酶，它可起着巨噬细胞样的杀伤作用。2.2红细胞的免疫粘附作用2.3防御感染3红细胞免疫功能异常与疾病目前认为原发性癫痫和银屑病的发病也与自身免疫有关。郭峰等曾观察到这两种疾病患者的红细胞免疫功能的变化与SLE等其它自身免疫病患者是一致的。

另外，再生障碍性贫血的患者，其红细胞的免疫粘附作用降低，可能是由于患者造血功能障碍，所产生的红细胞数量少而且质量低劣，致使红细胞膜上的C3b受体生成不足。慢性布氏菌病患者，其红细胞免疫功能亦降低，致使清除感染因子的能力减弱，这种现象可能是引起该病经久不愈的原因之一。4红细胞免疫功能的检测及其临床意义意义：RBC-C3bR花环率和RBC-IC花环率可作为红细胞天然免疫粘附功能的指标。

（1）若两项指标都低下，判为原发性红细胞免疫功能低下，为红细胞膜C3b受体受到破坏或遗传基因缺陷及其他影响所致。
（2）若RBC-C3bR花环率降低，而RBC-IC花环率增高，则为继发性红细胞免疫功能低下，是由于红细胞CR1上免疫复合物或补体调理的抗原量增加所致。
（3）若这两项指标都上升，判断为红细胞天然免疫功能亢进与紊乱。4.2红细胞CR1数量的测定4.2.2红细胞CR1流式细胞仪测定方法具体操作程序：
在编号试管中分别加冷PBS50µl，加入鼠抗人红细胞CR1(CD35)单抗1.5µl及待测枸橼酸钠抗凝新鲜血0.5µl，充分吹打混匀，置室温下避光30min。加入PBS液2ml，1500r/min离心5min，弃上清液；加入荧光素标记的第二抗体—羊抗鼠IgG-FITC1µl，吹打混匀，置室温下避光30min；再加入PBS液2ml，充分混匀、洗涤，1500r/min离心5min，弃去上清夜后加入PBS300µl，混匀后置流式测试管中，严格按照流式细胞仪操作程序测定样品和对照品，在计算机屏幕上显示或记录各待测标本红细胞平均荧光强度。意义：红细胞CR1数量流式细胞仪测定结合CR1基因多态性及红细胞CR1活性测定，对临床上红细胞免疫功能缺陷与亢进分型更为客观，对临床辅助诊断及疗效指标都具有重要应用价值。

4.2.3红细胞CR1单抗免疫酶联法（ELISA法）5正常红细胞与异常红细胞毛细管电泳分离样品制备

1)正常红细胞悬浮液
用含6%葡萄糖的0.1mol/L，pH7.4的磷酸盐缓冲液稀释红细胞，通过血球板计数法，确定细胞浓度为1.86×107个/mL。
2)异常红细胞悬浮液
取上述浓度红细胞0.2mL与H1N1甲亚型流感病毒0.02mL充分混合，常温(25℃)下反应1ｈ。电泳条件

每天运行前用0.1mol/LHCl、0.1mol/LNaOH、水、缓冲液分别洗柱3、6、3、3min；每轮运行前均用0.1mol/LNaOH、水、缓冲液分别洗柱3、1、1min；结束实验时用0.1mol/LHCl、0.1mol/LNaOH和水分别洗柱5、10、5min，最后将毛细管内壁吹干保存。正极进样，负极检测，均在室温下进行。进样压力3.448kPa，进样时间5s；分离电压20kV；紫外检测波长214nm；分离温度25℃。感染病毒后，在病毒作用下红细胞表面荷电量会发生改变，致使细胞电泳速度和zeta电位发生改变。实验证明，被病毒感染的红细胞与正常的红细胞的出峰时间有明显的差别（被病毒感染的红细胞出峰时间要比正常的红细胞出峰时间晚），且峰形有了显著的变化。
细胞的电泳行为与细胞表面的电荷量直接相关，而细胞表