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植物组织培养技术 植物组织培养是70年代快速发展并趋成熟的现代生物技术,是在 含有营养物质及植物生长调节物质的培养基中离体培养植物组织(器官或 细胞)的技术。它的理论依据是植物细胞的全能性,即植物体的每一个细 胞都有分化成一个完整植株的潜在能力。该技术在品种选育、名特优品种 的快速繁殖、自然资源的保护、品种质量的提高、濒危植物种质保存等诸方 面都表现出巨大的应用前景,取得了明显的经济效益。 组织培养前景广阔植物组织培养技术一诞生就表现了强大的生命 力和美好的前景。它在细胞学、遗传学、农学、生理学、生物化学等学科的 基础理论研究中,成了一种常用的生物学技术;在实际应用中也发挥了巨 大作用,取得了显着的经济效益和社会效益。 育种:通过组织培养技术,结合诱变育种技术,成功地培育出 许多优良品种。如抗黄化叶病的大麦品种;培育出脱病毒的马铃薯、甘蔗 品种,使马铃薯产量增加十多倍;选育出早熟(比母本提早15天)、优 质(含糖量9.5%)、高产(单果平均重106克)的京早三号桃(中科 院植物所培育)等等,这些例子不胜枚举。 快速繁殖:应用组织培养技术可使某一个优良品种得到快速繁 殖,可在一年内从一个芽或一张叶片,培养与繁殖成几十万或上百万株小 苗,使得该优良品种很快得以推广。如浙江省金华婺东葡萄良品场, 1990年将日本引进的葡萄品种栽培成功后,我们通过快速繁殖,使每月的 增殖系数达到6〜9,可使一个芽在一年之内产生100万个芽。快繁技术在花 卉、果树等经济植物的优良品种繁育中,取得了良好的经济效益。 名、特、优、稀植物品种的保存与繁殖:许多名贵植物(如兰 花)由于繁殖慢或困难,数量不多;而众多的野生植物(如花卉、药材) 由于人们过度的采伐,变成濒危植物。这些品种的保存与繁殖越来越显得重 要与紧迫。应用组织培养技术,不仅可以在实验室条件下保存种质,还可以 进行工业化生产,大量繁殖来满足人类生活的需求。 无土栽培:现代正在快速推广的无土栽培技术,就是建立在组织 培养的基础理论之上的,特别是无土栽培中的营养液成分,与组织培养的培 养基配制基本相似。无土栽培以其高产、低成本、低污染与低有害物质的 残留而倍受人们的欢迎。 快速繁殖 植物快速繁殖技术自60年代开始用于兰花生产以来已得到快速 发展。开始时主要应用于花卉生产,现逐渐应用于蔬菜、果树等其他园艺 作物,近年来又应用于造林树种的繁育上。现已有数百种植物可通过组织 培养进行快速繁殖,并进行了商品化的大规模生产。其中包括用于切花生 产的香石竹、唐菖蒲、非洲菊、花烛、百合、菊花等;还有兰花、非洲紫罗 兰、大岸桐、杜鹃和某些蕨类植物和观叶植物;以及草莓、芦笋、香蕉、葡 萄、桉树等经济作物。在很多国家已成为一种新兴的产业。 该技术的主要优点有: ①所需要的植物材料少;②繁殖速度快,不管从总体上还是单位 面积上,其繁殖速度都大大快于常规方法;③如结合茎尖培养等脱病毒技 术,可改良作物品种。 快速繁殖技术一般可分成四个阶段,即无菌培养物的建立,芽的 增殖,诱导生根和试管苗的移栽。 无菌培养物的建立 要选择合适的外植体(用于组织培养的植物材料),主要有芽 (顶芽为主)、叶片、带芽的茎切段等。取得的外植体首先要进行消毒灭 菌工作:用自来水冲洗干净—吸水纸吸干表面水分—70%酒精浸 5〜10秒—无菌水冲洗—2%-10%勺次氯酸钠溶液浸泡6〜15分钟—无菌水冲 洗三次—接种于培养基上。 培养基是组织培养成功与否的关键,不同的培养目标可选择不同 的培养基。常见的有MS、LS、B、Nitsch、White等培养基,它们的主要 成分可分为五大类: ①无机营养物,有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、锌、 钼、铜、钻等矿质元素,相当于日常植物栽培中的肥料所含的物质;②碳 源,主要有蔗糖、葡萄糖、果糖等,相当于光合作用所生产的营养物质;③ 维生素,它们有利于离体培养物的发育,有维生素B维生素B、生物素、烟 酸、肌醇芽;④有机附加物,有橄子汁、果汁、琼脂等;⑤生长调节物质, 主要有生长素和细胞分裂素,它们的比例调节着培养物的生长与分化方式, 当生长素和细胞分裂素比例低时,有利于芽的生长与分化,当其比例高时, 有利于根的诱导。 培养基配制好后,装在三角烧瓶或试管等玻璃容器中,加上棉 花塞(或铝铂纸)后进行高压灭菌。高压灭菌一般在高压锅内进行,在 120C,1.12公斤/厘米压力下,保持15〜20分钟。灭菌后的培养基可用于接 种培养物,或在10C下保存备用。 灭菌后的外植体在无菌箱(或超净工作台)上接种到灭菌后的 培养基上,然后放置于培养室中培养。培养过程要求一定的光