土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法.docx

土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后用小铲子除去表土取离地面5-15cm处的土约10g盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中扎好标记记录采样时间、地点、环境条件等以备查考。土样在自然条件下烘干装入袋中备用。所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中再加水稀释至1000mL此溶液1mL含100µgN。往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度制备成的溶液在490nm下比色并绘制标准曲线。醋酸缓冲液：PH5.0NaAc.3H2O50g溶于适量水中加6mol/LHAc34ml稀释至500ml。硼酸缓冲液：PH9.080毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液直至生成的红色沉淀不再溶解为止。加入氢氧化钾30g并溶解之再加入氯化汞饱和溶液1ml加水至200ml。静置取上层清液贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升溶液在暗色中稳定（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚）待颜色稳定后570nm比色绘制标准曲线。测定方法磷酸酶活性测定试验原理土壤中的磷很大部分以有机磷化合物的形式存在。磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。实验表明土壤微生物对于土壤含磷有机物质的矿化起着主要作用；土壤的磷酸酶活性在很大程度上取决于土壤的腐殖质含量活性磷量能矿化有机磷化合物的微生物数量植物类型等因素土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况。实验仪器恒温箱、分光光度计、实验药品甲苯、苯磷酸二钠、酚、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中用0.8(16滴)毫升甲苯处理15分钟后加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液中性磷酸酶用pH7.0的柠檬酸缓冲液酸性磷酸酶用pH5.0的醋酸缓冲液）。仔细混合后将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时然后用蒸馏水定容至刻度摇匀过滤用5毫升水代替基质以设置对照。为了测定反应混合物中的酚量取1毫升滤液于100毫升容量瓶中加5毫升硼酸缓冲液（pH9.0）再加入3毫升2.5%的铁氰化钾和3毫升0.5%的4-氨基安替吡啉摇动溶液呈粉红色然后再加水定容待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟）在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克数表示。脲酶活性测定试验原理土壤的脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。根基土壤可测得最大的脲酶活性人们常用土壤的脲酶活性表征土壤的氮素状况。实验仪器锥形瓶、定性滤纸、震荡器、分光光度计、1mm筛、实验药品酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、铵态氮标准溶液、双蒸水实验步骤准确称取10.00g过1mm筛的风干土样置于150mL锥形瓶中注入50mL20%的NaCl溶液将瓶塞紧在振荡30min(120r/min)后用定性滤纸过滤。取20mL滤液于50mL容量瓶中加双蒸水稀释至40mL左右加2mL25%酒石酸钠充分摇动静置5min使其与CdMg离子络合；再加入10滴1%阿拉伯胶摇动后加2mL纳氏试剂边加边摇定容至刻度5min后用490nm比色配制铵态氮标准溶液绘制标准曲线比色后求算土壤脲酶活性。结果分析滴定法测定过氧化氢酶活性试验原理土壤的过氧化物酶活性与土壤的呼吸强度和土壤微生物活动相关在一定程度上反映土壤微生物过程的强度。根际土壤的过氧化物酶活性远较根际外土壤为高。有机质含量高的土壤过氧化氢酶活性较强。因此土壤过氧化物酶的活性可以表征土壤总的生物学活性和肥力状况。本试验采用滴定法测定过氧化氢酶活性即通过定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量。实验仪器致密滤纸、酸式滴定管、1mm筛实验药品双蒸馏水、H2SO4、过氧化氢、KMnO4、实验步骤准确称取5.00g过1mm筛的风干土样置于150mL锥形瓶中注入40mL双蒸馏水和5mL0.3%过氧化氢另设对照塞紧瓶盖振荡30min(120r/min)后注入5m