连翘酯苷论文分析.docx

连翘酯苷论文分析

1、材料1。1仪器与试剂美国BECKMAN高效液相色谱仪，125型泵，168型PDA检测器，32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器（HAMILTON公司）；微孔滤膜φ＝13mm，0。45μm（天津市色谱科学技术公司）；YCQ—300型超声波清洗器（上海凯波超声设备有限公司）。甲醇为色谱纯，水为双蒸水并经0。45μm水系滤膜过滤。1。2样品连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分离精制，并经UV、IR、NMR鉴定结构，HPLC检测，面积归一化法计算纯度，均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株Vahl和F。viridissimaLindl。，果实具体采收时间见表1。50℃干燥至恒重后，研成粉末，过2O目筛，备用。2、方法与结果2。1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Diamonsil—C18（5μm，4。6mm×250mm）。流动相：A—水，B—甲醇；B相洗脱梯度：0～14min，34。6%；14～15min，34。6%～43。5%；15～23min，43。5%；23～24min，43。5%～45%；24～34min，45%；34～36min，45%～80%；36～40min，80%；流速：1mL/min。柱温：室温28℃；灵敏度0。02AUFS；检测波长270nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3300，以连翘苷计应不低于7600。色谱图见图1。2。2对照品溶液的制备分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9。86、4。40mg置于10mL量瓶中，用60%甲醇定容至刻度，置于冰箱中（4℃）保存备用。2。3供试品溶液的制备精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1。000g置于具塞三角瓶中，精确加入甲醇30mL，精密称质量，超声提取30min后，用甲醇补足质量，加20mL双蒸水，混匀，用微孔滤膜（4。5μm）过滤，作为供试品溶液。2。4标准曲线及线性范围的考察精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50μL，进样测定，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法以进样量X（μg）对峰面积Y进行回归，得连翘酯苷和连翘苷的回归方程，分别为：Y＝582121X－816019，r＝0。9997；Y＝580793X－33182，r＝0。9998。结果表明，连翘酯苷进样量在2。96～49。30μg、连翘苷进样量在1。32～22。00μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2。5检测限和定量限测定连翘酯苷的检测限（S/N＝3）为18。72ng/mg，定量限（S/N＝10）为62。41ng/mL；连翘苷的检测限（S/N＝3）为13。74ng/mL，定量限（S/N＝10）为45。79ng/mL。2。6精密度试验精密吸取混合对照品溶液20μL，连续进样6次，测定峰面积，结果连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1。20%、1。04%。。取同一连翘果实（LQ—1）样品6份，制备供试品溶液，各取20μL进样，测定峰面积，计算，连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为2。00%、0。68%。精密吸取混合对照品溶液20μL分别于配制后的0、4、8、16、24、48h内进样，测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1。61%、1。96%。结果表明，对照品溶液在48h内稳定。2。7样品中连翘酯苷、连翘苷的'含量测定取连翘各部位的干燥粉末，按供试品溶液制备方法操作，按照色谱条件测定峰面积，以外标法计算含量，采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察，分别提取并观察230、254、270、280、324、365nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280nm处其他物质的吸收较强，干扰较大，324、365nm波长处干扰较小，但连翘苷无吸收，而270nm处4个待检测物质的吸收峰峰形较好且其他物质的吸收较弱，干扰较少，结果较为准确。故本试验中选择了270nm作为检测波长。