一株产赤霉素GA4菌株及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114958626A(43)申请公布日2022.08.30(21)申请号202210796369.2C12P27/00(2006.01)(22)申请日2022.07.06C12R1/77(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20226832022.05.19(71)申请人江西新瑞丰生化股份有限公司地址331307江西省吉安市新干县盐化工业城内(72)发明人聂志奎罗琴聂波周金龙谌鹏飞宋志远毛玉华周圣骄肖江廖海兵(74)专利代理机构南昌贤达专利代理事务所(普通合伙)36136专利代理师张文宣(51)Int.Cl.C12N1/14(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一株产赤霉素GA4菌株及其应用(57)摘要本发明公开了开了一株产赤霉素GA4高产菌株及其应用。一株产赤霉素GA4的菌株，分类命名为藤仓赤霉(Fusariumfujikuroi)NRF01，已于2022年5月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO.M2022683。所述菌株是从原赤霉素GA3菌种经过ARTP多轮诱变与筛选获得。利用该藤仓赤霉NRF01菌株发酵生产赤霉素GA4的方法为：液氮罐保藏的菌株经过液体培养基活化，然后经过种子培养、发酵培养、提取分离得到目标产物赤霉素GA4。采取分阶段控制发酵条件，发酵120小时，其发酵水平达到1200mg/L以上，且该菌株不产生赤霉素GA1和赤霉素GA7副产物，发酵水平稳定，适合工业化生产。CN114958626ACN114958626A权利要求书1/1页1.一株产赤霉素GA4的菌株，该菌株分类命名为：藤仓赤霉(Fusariumfujikuroi)NRF01，已于2022年5月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO.M2022683。2.根据权利要求1所述的一株产赤霉素GA4的菌株在发酵生产赤霉素GA4的应用，其特征在于：该藤仓赤霉NRF01菌株只产生赤霉素GA4目标产物，不产生赤霉素GA1和赤霉素GA7副产物。3.根据权利要求1所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将所述藤仓赤霉NRF01菌株接至液体活化培养基中进行活化，控制温度28－30℃，摇床转速200－300rpm，培养24－48小时，得到活化菌液；S2、按照体积比，将步骤S1中已活化的菌液5－10％接种至含有种子培养基的摇瓶中，控制温度28－30℃，摇床转速300－400rpm，培养18－36小时，得到种子液；S3、按照体积比，将步骤S2中的种子液10－15％接种至含有发酵培养基的摇瓶中，进行双阶段发酵培养后，得到不含赤霉素GA1和赤霉素GA7副产物的赤霉素GA4发酵醪液；S4、将步骤S3中得到的赤霉素GA4发酵醪液进行提取分离，得到赤霉素GA4产品。4.根据权利要求3所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于，步骤S1所述的液体活化培养基按照质量/体积比计为：葡萄糖2.0－5.0％，黄豆饼粉1.5－2.5％，花生饼粉0.8－1.5％，KH2PO40.8－1.6％，(NH4)2SO40.005－0.015％，MgSO4.7H2O0.05－0.15％。5.根据权利要求3所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于，步骤S2所述的种子培养基按照质量/体积比计为：葡萄糖1.0－3.0％，黄豆饼粉1.5－2.5％，花生饼粉0.8－1.5％，糊精2.0－4.0％，KH2PO40.08－0.16％，(NH4)2SO40.01－0.03％，MgSO4.7H2O0.05－0.15％。6.根据权利要求3所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于，步骤S3所述的发酵培养基按照质量/体积比计为：碳源8％－12％，氮源2.5－4.0％，MgSO4.7H2O0.08－0.12％，(NH4)2SO40.02－0.04％，KH2PO40.15－0.30％。7.根据权利要求3所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于，步骤S3所述的双阶段发酵培养包括发酵前期和发酵后期；在发酵前期，培养温度28－30℃，摇床转速220－300rpm，培养时间24－48小时；在发酵后期，培养温度31－33℃，摇床转速160－220rpm，培养时间72－96小时。8.根据权利要求6所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA4的方法，其特征在于：所述发酵培养基中的碳源，选自淀粉液化液、糊精、饴糖、麦芽糖、葡萄糖的一种或者几种组合。9.根据权利要求6所述的一株产赤霉素GA4的菌株用于发酵生产赤霉素GA