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聚合酶链反应(PCＲ)检验实验室

检查要点指南(２016版)

聚合酶链反应检验实验室就是指通过基因扩增得方式检测特定

得ＤＮA或RＮA得检验实验室。聚合酶链反应(PolｙmｅrａseCｈ

ainRｅaｃｔｉon,PCR)就是一种在体外特异性扩增靶ＤＮA序列得

技术,其基本过程为模板双链DNA得变性、引物与模板DＮA得退火与

在DNＡ聚合酶引导下得链延伸反应三个阶段得多次循环。每一次循

环后得扩增产物均可作为下一轮循环得模板,理论上,扩增产物量呈

指数形式上升,即经过n个循环后,产物量增加到2ｎ倍、ＰCR试剂操

作简单,短时间内在体外可获得数百万个特异靶DＮA序列得复制,为

临床疾病得诊断、治疗监测与预后评估提供了一种极有帮助得实验室

辅助手段、

PCR检验实验室就是PＣR试剂生产企业在产品检验过程中不可

缺少得工作环境,其环境控制水平与质量管理水平直接影响着最终产

品就是否合格,能否放行。由于该产品本身得特殊性,《医疗器械生产

质量管理规范附录体外诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外

诊断试剂现场检查指导原则》条款中,明确对ＰＣR试剂得生产与检

验环境做出规定、此外现行卫生行业得法规、标准以及相关文献中对

于PCR检验实验室均作出规定,主要涉及《全国临床检验规程》(第三

版)、《医疗机构临床基因扩增管理办法》(卫办医政发〔20１０〕１

94号)、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》及《临床诊

断中聚合酶链反应(PCR)技术得应用》(ＷＳ/T２30—2002)等行业标

准得相关要求、

本检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对PCR检验

相关过程得认知与把握,指导全市医疗器械监管人员对ＰＣＲ检验实

验室设计建设与质量控制得监督检查工作。同时,为PＣＲ试剂生产

企业在PCR检验实验室得设计建造与管理要求提供参考。

当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时,应当重新讨论以

确保本检查指南持续符合要求。

一、适用范围

本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施得体外

诊断试剂产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》

现场核查、医疗器械生产监督检查等各项涉及PＣＲ检验实验室检查

得参考资料、

基因测序检验实验室等涉及PCR试剂得相关部分应当参照本检

查指南执行。

二、检查要点

(一)现场查瞧生产企业PCR检验实验室布局

生产企业应当提供PＣR检验实验室设计方案与/或平面设计图

(应当标明风向或压差梯度)、

1.PCR检验实验室与PＣR试剂生产区域应当在各自独立得建筑

物或空间内,保证空气不直接联通,防止扩增时形成得气溶胶造成交

叉污染。

２、原则上PCR检验实验室应当设置以下区域:试剂储存与准备

区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。根据使用仪器得功能,

区域可适当合并。若使用实时荧光定量PCR仪且不需要进行后续产物

分析工作,扩增区、扩增产物分析区可合并、若使用样本处理、核酸

提取及扩增检测为一体得自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩

增产物分析区可合并。

3。各区域在物理空间上应当完全相互独立,各区域无论就是在空

间上还就是在使用中,应当始终处于完全得分隔状态。不应当只就是

形式上得分区,不应当就是一个区域嵌套一个区域。

4、各区域不应当有空气得直接相通、扩增区与扩增产物分析区

各区域宜采用独立直排方式出风。采用空调机组方式得,PCR检验实

验室应当具备独立空调机组;同时应当考虑停机后各房间空气连通得

可能性,采取必要得控制措施。

5.按照试剂储存与准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分

析区方向空气压力应当以递减得方式进行,使得PCR检验实验室得空

气流向应当按照试剂储存与准备区→标本制备区→扩增区→扩增产

物分析区方向进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前得区域。空

气流向应当为单向,禁止下游污染上游。应当设置合理得压差梯度,

并安装压差监测装置,以有效证明空气流向,压差梯度不宜低于5帕。

6.设置缓冲间得,缓冲间内通向内实验室与走廊得门应当安装连

锁装置或采取相应措施,避免出现两个门同时打开得情况。

7、各区间若设置传递窗,应当为双侧开门,要求密封严实,并且两

侧得门应当为互锁装置或采取相应措施保证两侧门不会同时开启、

(二)现场查瞧仪器设施配置

１、试剂储存与准备区得功能:贮存试剂得制备、试剂得分装与

扩增反应混合液得准备,以及离心管、吸头等消耗品得贮存与准备。

配套用品一般应当包括:

混匀(2)ﻫ;温度调控范围为2℃~8℃与(或)－２0℃以下冰箱(1)

器;

;紫外消毒设备(4)ﻫ;微量加样器(３)

(５)消耗