高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102286417A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102286417A(43)申请公布日2011.12.21(21)申请号201110268516.0(22)申请日2011.09.09(71)申请人宜春强微生物科技有限公司地址336000江西省宜春市袁州区西村镇国桥工业开发区(72)发明人钟启平杨林海(74)专利代理机构宜春赣西专利代理事务所36121代理人朱兵(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12R1/46(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺(57)摘要本发明就是要提供一种高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺，用高密度固体发酵培养工艺，1）以米糠、麸皮、玉米粉、豆粕中任意一种或几种原料，和活性炭作固态培养基料；2）于固态培养基料中加入营养液培养基作为固态发酵培养基；3）将固态发酵培养基灭菌后,接种粪肠球菌种液，经培养，干燥，粉碎制得高密度粪肠球菌产品；所述的营养液培养基各质量组分组成为：葡萄糖：5～20.0，蛋白胨：1～10.0，牛肉膏：1～5.0，酵母膏：1～5.0，硫酸镁0～0.5，硫酸锰0～0.2，磷酸氢二钾：0.5～3.0，去离子水1000，pH6.0～7.5；具有投资少、节能减排、清洁环保、产品保存性好，活性高，产品含活菌量高等特点。CN1028647ACCNN110228641702286427A权利要求书1/2页1.一种高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是采用固体发酵培养工艺，包括：1）以米糠、麸皮、玉米粉、豆粕中任意一种或几种原料，和活性炭作为固态培养基料；2）于固态培养基料中加入营养液培养基作为固态发酵培养基；3）将固态发酵培养基灭菌后,接种粪肠球菌种液,经培养,干燥，粉碎制得高密度粪肠球菌产品；所述的营养液培养基各质量组分组成为：葡萄糖：5～20.0，蛋白胨：1～10.0，牛肉膏：1～5.0，酵母膏：1～5.0，硫酸镁0～0.5，硫酸锰0～0.2，磷酸氢二钾：0.5～3.0，去离子水1000，pH6.0～7.5；所述的粪肠球菌种液为用MRS液体培养基接种粪肠球菌培养制得。2.依据权利要求1所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述固体发酵培养工艺，包括：1）固态培养基料各组分组成按质量比为米糠:麸皮:玉米粉:豆粕:活性炭=1：1.5～2.5:1.5～2.5:2.5～3.5:1.5～2.5的比例混合；2）于上步固态培养基料中按质量比固态培养基料：营养液培养基为1：1～1.5的比例加入营养液培养基，并加入饲料用稀土添加剂，制成固态发酵培养基；3）将2）步制得的固态发酵培养基，湿热灭菌，冷却后接种粪肠球菌种液，培养，干燥，粉碎制粪肠球菌产品；所述的粪肠球菌种液是用MRS液体培养基，经灭菌冷却后，接种粪肠球菌斜面种子，在30℃～40℃温度，180rpm转速下,于摇床上培养18～20小时制得。3.依据权利要求1或2所的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述3）步固态发酵培养基经灭菌冷却后，接种粪肠球菌种液，粪肠球菌种液接入量为固态发酵培养基质量的5～20%，培养过程中控制培养温度30～40℃，时间20～72小时。4.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述3）步的培养过程中至少进行一次以上营养液培养基的流加操作。5.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述活性炭为颗粒状活性炭,其颗粒直径控制在3～8mm。6.依据权利要求1或2所的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是3）步所述的干燥粉碎是发酵培养后，物料于35～50℃下通风干燥至含水量10%以下，再粉碎至60～80目即为粪肠球菌成品。7.依据权利要求2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述2）步饲料用稀土添加剂为含有镧、铈有效元素的饲料用稀土添加剂；添加剂加入量按质量比是固态培养基料：营养液培养基：饲料用稀土添加剂为1：1.0～1.3：0.00008～0.00015。8.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述的粪肠球菌种液的制备是:MRS液体培养基各质量组分组成为：蛋白胨8～12，牛肉膏8～12，酵母膏3～6，柠檬酸氢二铵1～3.0，葡萄糖15～25，吐温801，乙酸钠3～6，磷酸氢二钾1～3，硫酸镁0.4～0.8，硫酸锰0.1～0.3，蒸馏水800～1200，pH=6.2～6.6；灭菌条件为温度110～121℃，时间20～30分钟,接种粪肠球菌斜面种子，放置于摇床上培养18～24小时，即得到粪肠球菌种液。9.依据权利要求4所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是分二次进行流加操2CCNN110228641702286427A权利要求书2/2页作