固相萃取-液相色谱-电喷雾串联质谱法测定牛奶中香兰素、乙基香兰素、香豆素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102507833102507833B(45)授权公告日2014.10.08(21)申请号201110350198.2李海燕等.巧克力中香兰素的快速分离柱高效液相色谱法测定.《安徽农业科学》.2009,第(22)申请日2011.11.0837卷(第21期),9841-9842.(73)专利权人韩超LowriS.deJageretal.Determination地址325000浙江省温州市鹿城区蒲鞋市街ofcoumarin,vanillin,andethylvanillin道学院中路315号invanillaextractproducts.《Journalof(72)发明人韩超刘翠平刘滨陈祥准ChromatographyA》.2007,第1145卷83-88.朱振瓯MRatersetal.Analysisofcoumarinin(74)专利代理机构温州瓯越专利代理有限公司variousfoodsusingliquidchromatography33211withtandemmassspectrometricdetection.代理人李友福《EurFoodResTechnol》.2008,第227卷637-642.(51)Int.Cl.G01N30/89(2006.01)审查员肖锡峰(56)对比文件US2008127720A1,2008.06.05,CN101991082A,2011.03.30,罗冠中等.液相色谱串联四极杆质谱法同时测定婴幼儿配方食品中甲基香兰素和乙基香兰素.《分析实验室》.2011,第30卷(第8期),84-87.权权利要求书1页利要求书1页说明书6页说明书6页附图3页附图3页(54)发明名称固相萃取-液相色谱-电喷雾串联质谱法测定牛奶中香兰素、乙基香兰素、香豆素的方法(57)摘要本发明公开了一种固相萃取-液相色谱-电喷雾串联质谱法测定牛奶中香兰素、乙基香兰素、香豆素的方法，建立了高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱法同时测定牛奶中香兰素、乙基香兰素和香豆素的检测方法。本发明的方法能够同时测定牛奶中香兰素、乙基香兰素和香豆素，样品用甲醇/水混合溶液超声提取，提取溶液经C18固相萃取柱净化，使用C18反相柱分离；在等度条件下分析，目标分析物在多反应监测模式下以保留时间和离子对信息比较进行定性分析，内标法定量，本方法分析速度快、灵敏度高、重现性好，为评价牛奶样品质量提供了新的检测方法。CN102507833BCN1025783BCN102507833B权利要求书1/1页1.一种固相萃取-液相色谱-电喷雾串联质谱法测定牛奶中香兰素、乙基香兰素、香豆素的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：①超声萃取：称取牛奶1.7～2.3g，加入0.8～1.5mL13C标记的香兰素和0.8～1.5mL5,6,7,8-D4标记的香豆素，所述13C标记的香兰素的浓度为500μg/L，所述5,6,7,8-D4标记的香豆素的浓度为500μg/L，再加入17～23mL的甲醇/水混合溶液，甲醇/水混合溶液中甲醇与水的体积比为1:1，在27～33℃下超声处理25～35min，超声频率为36～38kHz，取出静置，取上层清液，定容，得到待净化液；②固相萃取净化：取VARIANBONDELUTPLEXAC18SPE柱，依次用甲醇和水活化SPE柱，取4～6mL待净化液至SPE柱，再依次用4～6mL水和4～6mL甲醇/水混合溶液淋洗SPE柱，所用的甲醇/水混合溶液中甲醇与水的体积比为2:8；将SPE柱真空抽干，用8～12mL的甲醇/水混合溶液对SPE柱进行洗脱，洗脱所用的甲醇/水混合溶液中甲醇与水的体积比为1:1，得到洗脱液，将洗脱液过微孔滤膜，备用；③标准溶液的配置：取香兰素、乙基香兰素、香豆素、13C标记的香兰素和5,6,7,8-D4标记的香豆素，用甲醇/水混合溶液分别配制成质量浓度为100mg/L的单标储备液，进行测定使用时，用甲醇/水混合溶液，甲醇/水混合溶液中甲醇与水的比例为1:1，稀释上述标准储备液，将香兰素、乙基香兰素、香豆素分别配制成1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50µg/L的混合标准工作溶液，同时将13C标记的香兰素和5,6,7,8-D4标记的香豆素配制成1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，10µg/L的混合标准工作溶液；④测定：将过0.45μm微孔滤膜厚的洗脱液进入LC-MS/MS，采用多反应监测(MRM)模式检测，内标法定量，所述的LC-MS/MS的色谱条件如下：TM色谱柱：WatersXBridgeC18反相柱，色谱柱规格为2.1×150mm，3.5μm；流速：300μL/min；流动相：A为0.1%甲酸的水溶液，B为