食品和饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102559919A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102559919A(43)申请公布日2012.07.11(21)申请号201210050191.3(22)申请日2012.02.29(71)申请人上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心地址200135上海市浦东新区民生路1208号(72)发明人张舒亚李富威王赢袁辰刚曾庆坤林波(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人陈静(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书77页页序列表序列表22页页附图附图11页页(54)发明名称食品和饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法(57)摘要本发明涉及食品和饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法。首次揭示一种可特异性鉴定水牛成分的引物，所述引物针对含有水牛成分的DNA可发生特异性扩增，而对没有水牛成分的DNA不发生特异性扩增。本发明还提供了一种简化的PCR检测方法，所述的方法可良好地应用于鉴定水牛成分，并且具有良好的再现性、灵敏度。CN10259ACN102559919A权利要求书1/1页1.一种鉴定水牛成分的方法，其特征在于，所述方法包括：以待测样品的DNA为模板，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含水牛成分。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的引物以及SEQIDNO：3所示的Taqman探针进行实时荧光PCR检测。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的待测样品是食品或饲料。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的检测灵敏度为10-3ng/μLDNA。5.一种引物，其特征在于，所述引物是引物对，其序列如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示。6.一种Taqman探针，其特征在于，所述的探针序列如SEQIDNO：3所示。7.权利要求5所述的引物和/或权利要求6所述的Taqman探针的用途，用于从待测样品中鉴定水牛成分。8.一种鉴定水牛成分的试剂盒，其特征在于，其中包括权利要求5所述的引物和/或权利要求6所述的Taqman探针。9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：含有水牛成分的检测标准品。10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定水牛成分的方法的使用说明书。2CN102559919A说明书1/7页食品和饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法技术领域[0001]本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品或饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。背景技术[0002]作为一类高级营养食品，水牛奶制品日渐成人们消费的“新宠”，被誉为“奶中之王”。水牛奶、水牛奶酪、水牛奶保健产品和婴儿食品系列产品是高附加值的奶制品，产品价值和营养价值均高于普通牛奶制品数倍。作为商业上极有价值的成分，水牛奶的糖含量、乳蛋白与酪蛋白含量比黄牛奶高，且富含矿物质和微量元素，营养价值高，水牛乳乳香浓稠，风味浓郁、口感饱满，是老少皆宜的营养佳品。水牛奶是地方特色产品。意大利水牛奶业生产水平高，产品种类多，市场大，Mozzarella奶酪世界闻名，深受欧美市场的欢迎。水牛奶酪远销英、法、美等国家和地区，主要在高档餐馆和美食店销售，价值极昂贵。在中国，以广西水牛头数最多，其后依次是云南，广东，贵州，湖北，四川，湖南，江西和安徽。水牛奶加工的产品为姜撞奶、双皮奶等。因为水牛奶产量不高，并且价格较贵，所以目前在水牛奶及制品中掺入普通牛奶的现象很普遍。[0003]目前关于乳制品掺假的检测方法有电泳、色谱、免疫化学、DNA技术等，以DNA为基础的PCR等方法通过对DNA扩增进行乳品种的分析，灵敏、特异、简便、快速、稳定性好。但是，目前还没有检测效果良好的特异性检测水牛成分的试剂和方法。发明内容[0004]本发明的目的在于提供食品或饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。[0005]在本发明的第一方面，提供一种鉴定水牛成分的方法，所述方法包括：[0006]以待测样品的DNA为模板，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含水牛成分。[0007]在一个优选例中，以SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的引物以及SEQIDNO：3所示的Taqman探针进行实时荧光PCR检测。[0008]在另一优选例中，所述的待测样品是食品或饲料。[0009]在另一优选例中，所