预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共19页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102766206A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102766206A(43)申请公布日2012.11.07(21)申请号201210227845.5(22)申请日2012.07.02(71)申请人北京济福霖生物技术有限公司地址100193北京市海淀区马连洼北路158号众鼎大厦306室(72)发明人于添(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王朋飞张庆敏(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/18(2006.01)A61P7/06(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书1010页页序列表序列表33页页附图附图44页页(54)发明名称一种改善缺铁性贫血的产品及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种从转基因克隆牛乳中大量纯化重组人乳铁蛋白的方法,同时提供了一种利用纯化出的重组人乳铁蛋白为原料进行改善缺铁性贫血产品的开发,提供一种新型的补铁制剂产品--铁饱和重组人乳铁蛋白(FerhLF)。利用这种新的补铁制剂,大大增强了改善缺铁性贫血的效果,显著的提高了缺铁性贫血大鼠的血红蛋白浓度,且没有明显的不良反应,使用安全,效果明显,制备方法简单。CN10276ACN102766206A权利要求书1/1页1.一种改善缺铁性贫血的产品,其特征在于,其为铁饱和重组人乳铁蛋白。2.制备权利要求5所述改善缺铁性贫血产品的方法,其特征在于,使重组人乳铁蛋白3+与Fe在NaHCO3或KHCO3溶液中进行螯合;其中,所述重组人乳铁蛋白的氨基酸序列如SeqIDNo.1所示。3.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,其是将重组人乳铁蛋白粉末溶于水配制成溶液,然后将该溶液与FeCl3溶液以及NaHCO3或KHCO3溶液混合,搅拌后制成铁饱和重组人乳铁蛋白溶液,随后经过脱盐与冻干后即得铁饱和重组人乳铁蛋白粉末。4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述重组人乳铁蛋白粉末的制备包括如下步骤:1)转基因牛的制备。包括如下步骤:i)利用含有完整人乳铁蛋白基因的hLFBACDNA作为乳腺特异表达载体;ii)将hLFBACDNA与双标记选择载体pEGFP-NEO或单标记选择载体pNEO按比例混合,导入家畜体细胞核内,进行细胞转染,获得转入hLFBACDNA的转基因细胞;iii)细胞作为核供体进行体细胞克隆,获得转有hLFBACDNA的转基因牛;2)将由上述转基因牛产生的rhLF牛乳加热到40-45℃后进行乳脂分离,以65-75转/分钟连续脱脂两次;然后利用孔径为1.4μm的滤膜对脱脂牛乳进行微滤除菌;3)利用BPG140/500层析柱,以SPSepharoseBigBeads作为柱填料进行阳离子交换层析,用pH值6.5的PBS液进行洗脱,收集合并具有同一rhLF活性洗脱峰峰值的洗脱液;4)对洗脱液进行超滤浓缩及冷冻干燥,即得重组人乳铁蛋白粉末。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤3)中用含0.4MNaCl,pH值6.5的20mMPBS进行预洗脱去除杂蛋白,然后用含1MNaCl,pH值6.5的20mMPBS进行洗脱,收集合并具有同一rhLF活性洗脱峰峰值的洗脱液。6.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于,步骤4)中所述超滤具体为:将步骤3)中得到的具有同一rhLF活性洗脱峰峰值的洗脱液,经蠕动泵泵入超滤膜进行超滤浓缩,加入pH值6.0的20mM磷酸盐缓冲液,循环7次,直至浓缩液出口电导率低于1mS/cm,再将溶液进一步进行浓缩。2CN102766206A说明书1/10页一种改善缺铁性贫血的产品及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域,具体地说,涉及一种改善缺铁性贫血的产品及其制备方法。背景技术[0002]铁是血红蛋白的重要组成成分,在人体内起着输送氧气的作用,是人体必需的营养元素之一。机体缺铁会使免疫力下降,并伴有疲倦、易怒、烦躁、记忆力减退等症状。更重要的是机体缺铁会引起缺铁性贫血(Irondeficiencyanemia,IDA)。缺铁性贫血(IDA)是全世界发病率最高的营养缺乏性疾病之一。世界50亿人口中约有1/3的人贫血。而IDA或铁营养不良的人群约占5亿。在发展中国家铁缺乏(ID)发生率是发达国家的4倍。我国是世界上缺铁性贫血发生率较高的国家之一,各类人群IDA的平均发生率为15%-20%,其中妇女和儿童发生率高达20%以上。严重的地区儿童IDA发生率高达70%,育龄妇女的IDA发生率高达35%,贫血严重威胁妇女健康。[0003]虽然铁在食物中比较常见,但是铁在食物中的形态不利于机体的吸收和利用。目前医疗界普遍用补铁剂对缺铁性贫血的患者进行治