阴道上皮细胞培养基及阴道上皮细胞培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104630134A(43)申请公布日2015.05.20(21)申请号201510085157.3(22)申请日2015.02.15(71)申请人叶中华地址510600广东省广州市越秀区寺右新马路108号丰伟大厦20楼申请人周文良(72)发明人叶中华周文良朱蕴馨刘雯杨登亮黄洁虹(74)专利代理机构广州新诺专利商标事务所有限公司44100代理人刘婉(51)Int.Cl.C12N5/071(2010.01)权利要求书1页说明书2页附图2页(54)发明名称阴道上皮细胞培养基及阴道上皮细胞培养方法(57)摘要本发明提供了一种阴道上皮细胞培养基，其包括基础培养基和添加剂；其中，所述基础培养基为无血清培养基；所述添加剂包括表皮生长因子、牛垂体提取物、胰岛素-转铁蛋白-硒、胎牛血清、青霉素-链霉素和霍乱菌素。本发明还提供了一种阴道上皮细胞培养方法。本发明的阴道上皮细胞培养基成分明确，通过该培养基培养得到的上皮细胞数量多、成纤维细胞数量少、细胞融合状态好。CN104630134ACN104630134A权利要求书1/1页1.一种阴道上皮细胞培养基，其特征在于包括基础培养基和添加剂；其中，所述基础培养基为无血清培养基；所述添加剂包括表皮生长因子、牛垂体提取物、胰岛素-转铁蛋白-硒、胎牛血清、青霉素-链霉素和霍乱菌素。2.根据权利要求1所述的阴道上皮细胞培养基，其特征在于其各组分的比例为：所述基础培养基为47.2mL无血清培养基；所述添加剂包括8μL表皮生长因子、300μL牛垂体提取物、500μL胰岛素-转铁蛋白-硒、1.5mL胎牛血清、500μL青霉素-链霉素和0.9μL霍乱菌素。3.一种阴道上皮细胞的培养方法，其特征在于，采用如权利要求1或2所述的阴道上皮细胞培养基培养。4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：培养的前三天禁止移动，第四天开始换液，然后采用权利要求1或2所述的阴道上皮细胞培养基进行培养，培养温度为37℃。2CN104630134A说明书1/2页阴道上皮细胞培养基及阴道上皮细胞培养方法技术领域[0001]本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种阴道上皮细胞培养基，以及阴道上皮细胞的培养方法。背景技术[0002]由于阴道自身的结构特点，直接与外环境接触，性交过程等因素很容易接触感染病原微生物，而阴道存在着自净作用，并且作为第一道防线的上皮细胞在阴道先天免疫过程中发挥一定作用。研究人员较容易地在医院获得来自正常个体或阴道炎症患者的阴道上皮细胞。然而，现有技术中，阴道上皮细胞培养的培养基成分比较复杂，配置不方便；目前市面上的阴道上皮细胞分离培养试剂盒虽然操作简单，但价格昂贵，操作繁琐，不利于大批量的研究实验。发明内容[0003]针对以上要解决的问题，本发明的一个目的是提供一种阴道上皮细胞培养基，增加上皮细胞数量，减少成纤维细胞数量，改善细胞融合状态。[0004]本发明的另一个目的是提供一种阴道上皮细胞的培养方法，提高培养效率，降低阴道上皮细胞培养成本，简化操作。[0005]为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种阴道上皮细胞培养基。该阴道上皮细胞培养基包括基础培养基和添加剂；其中，基础培养基为无血清培养基；添加剂包括表皮生长因子、牛垂体提取物、胰岛素-转铁蛋白-硒、胎牛血清、青霉素-链霉素和霍乱菌素。[0006]根据本发明的阴道上皮细胞培养基，其各组分的比例为：所述基础培养基为47.2mL无血清培养基；所述添加剂包括8μL表皮生长因子、300μL牛垂体提取物、500μL胰岛素-转铁蛋白-硒、1.5mL胎牛血清、500μL青霉素-链霉素和0.9μL霍乱菌素。[0007]根据本发明的另一个方面，提供一种阴道上皮细胞培养方法。该培养方法采用本发明如上所述阴道上皮细胞培养基培养阴道上皮细胞。该培养方法是在培养的前三天禁止移动，第4天开始采用上述阴道上皮细胞培养基换液，第6-8天细胞开始融合，培养温度为37℃。[0008]应用本发明的技术方案，本发明的阴道上皮细胞培养基成分明确，通过该培养基培养得到的上皮细胞数量多、成纤维细胞数量少、细胞融合状态好，这对提高阴道上皮细胞原代培养细胞数具有重要意义。附图说明[0009]图1示出了实验中实施例2的阴道上皮细胞培养基培养大鼠阴道上皮细胞第6天细胞开始融合的图像；[0010]图2示出了上皮细胞特异的标志性角蛋白的广谱角蛋白免疫荧光染色图像。原代3CN104630134A说明书2/2页培养大鼠阴道上皮细胞的鉴定：a)光镜下原代培养大鼠阴道上皮细胞；b)绿色荧光显示原代培养的阴道上皮细胞特异性标记抗角蛋白的FITC免疫活性；c)未加一抗的阴性对照组光镜下细胞图；d)未加一抗的阴性对照组FITC荧光结果。