牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105886588A(43)申请公布日2016.08.24(21)申请号201610271132.7(22)申请日2016.04.28(71)申请人李健地址250000山东省济南市历下区历山路117号2-301(72)发明人李健(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法(57)摘要本发明公开了一种牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法，包括以下步骤：（1）将牛乳酪蛋白溶解；（2）加碱性蛋白酶水解；（3）灭活碱性蛋白酶；（4）沉淀酪蛋白；（5）离心除去酪蛋白；（6）超滤膜分离，除去大分子蛋白及多肽；（7）纳滤，除去小分子盐和氨基酸；（8）真空干燥。本发明的制备工艺简单，所得牛乳酪蛋白降胆固醇肽纯度高，降胆固醇活性最高可达74%，适合在医药领域中使用。CN105886588ACN105886588A权利要求书1/1页1.一种牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法，包括以下步骤：(1)将牛乳酪蛋白溶解在0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）中，用NaOH调节溶液PH值至8.0-8.5，酪蛋白溶液的最终质量浓度为40-50mg/ml；(2)加碱性蛋白酶水解，维持反应温度55-65℃，PH值8.5-9.5，反应时间90-180min；(3)灭活碱性蛋白酶，升温至90℃，维持10-20min；(4)沉淀酪蛋白，用5mol/L的盐酸调节PH值到4.0-4.6，使酪蛋白在其等电点处析出；(5)在10000r/min的条件下离心20min，除去酪蛋白沉淀，留上清液；(6)将步骤(5)中所得上清液经截流量为5000Da的中空纤维超滤膜进行分离，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；(7)用截流量300Da的纳滤膜，纳滤步骤(6)中所得透过液，除去小分子盐和氨基酸，收集回流液；(8)对步骤(7)收集的回流液进行真空干燥，即得所述的牛乳酪蛋白降胆固醇肽粉末；所述牛乳酪蛋白为食品级牛乳酪蛋白；所述盐酸为食用级盐酸；所述碱性蛋白酶为食品级碱性蛋白酶；所述步骤(2)中碱性蛋白酶的量为酪蛋白溶液的3%-4%。2CN105886588A说明书1/3页牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域,具体涉及一种牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法。背景技术[0002]由于血清中的高胆固醇是冠心病的多发因素之一，冠心病的发生是动脉粥样硬化的结果，动脉粥样硬化主要是脂质（胆固醇及其酯）积蓄在动脉壁的内层。高血脂症指血中脂肪物质如胆固醇、甘油三脂及脂蛋白代谢异常的疾病群，是由于血中脂肪物质过高所产生的疾病，它是造成动脉硬化症和心脏病发生的一个重要危险因子。肽类降胆固醇的作用主要是抑制胆固醇胶束的溶解度从而阻碍肠道内胆固醇的吸收，促使胆固醇排出体外，降低血液中血脂和胆固醇的浓度，使血脂异常回复正常以降低动脉硬化及心脏血管疾病的发生。目前已有很多的研究证明许多食物源蛋白质的蛋白酶水解产物对动物血清胆固醇水平有较大影响。但是，一直以来研究食物源蛋白生物活性肽对动物或人类血清胆固醇水平的影响更多的是采用大豆蛋白，而对于牛乳酪蛋白源生物活性肽对血液胆固醇水平的影响则研究较少。发明内容[0003]本发明的目的是利用牛乳中提取纯化的酪蛋白为原料，提供一种能有效抑制胆固醇吸收的牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法，工艺简单，纯度高，适合在医药领域中使用。[0004]为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：一种牛乳酪蛋白降胆固醇肽的制备方法，包括以下步骤：(1)将牛乳酪蛋白溶解在0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）中，用NaOH调节溶液PH值至8.0-8.5，酪蛋白溶液的最终质量浓度为40-50mg/ml；(2)加碱性蛋白酶水解，维持反应温度55-65℃，PH值8.5-9.5，反应时间90-180min；(3)灭活碱性蛋白酶，升温至90℃，维持10-20min；(4)沉淀酪蛋白，用5mol/L的盐酸调节PH值到4.0-4.6，使酪蛋白在其等电点处析出；(5)在10000r/min的条件下离心20min，除去酪蛋白沉淀，留上清液；(6)将步骤(5)中所得上清液经截流量为5000Da的中空纤维超滤膜进行分离，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；(7)用截流量300Da的纳滤膜，纳滤步骤(6)中所得透过液，除去小分子盐和氨基酸，收集回流液；(8)对步骤(7)收集的回流液进行真空干燥，即得所述的牛乳酪蛋白降胆固醇肽粉末；所述牛乳酪蛋白为食品级牛乳酪蛋白；所述盐酸为食用级盐酸；所述碱性蛋白酶为食品级碱性蛋白酶；所述步骤(2