一种抗组蛋白抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105954267A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610249004.2(22)申请日2016.04.20(71)申请人北京中航赛维生物科技有限公司地址101111北京市大兴区经济技术开发区经海二路29号院8号楼(72)发明人不公告发明人(74)专利代理机构北京中海智圣知识产权代理有限公司11282代理人杨树芬(51)Int.Cl.G01N21/76(2006.01)G01N33/532(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书3页说明书13页附图2页(54)发明名称一种抗组蛋白抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法(57)摘要本发明公开一种抗组蛋白抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒，该试剂盒包括：抗组蛋白抗体IgG校准品；抗组蛋白抗体IgG质控品；含生物素标记的组蛋白抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；含碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；清洗液。该试剂盒的检测方法在传统的膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上，将灵敏度和线性范围再提高3-5个数量级，实现真正意义的定量检测，反应迅速，结果可靠，并能配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动使用，对于临床诊断具有无可替代的重要价值。CN105954267ACN105954267A权利要求书1/3页1.一种抗组蛋白抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(1)抗组蛋白抗体IgG校准品，含抗组蛋白抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液，所述抗组蛋白抗体IgG校准品包含6个水平的液体校准品，所述6个水平的液体校准品中抗组蛋白抗体IgG的浓度分别为0，5，20，50，100，200RU/mL；(2)抗组蛋白抗体IgG质控品，含抗组蛋白抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液，所述抗组蛋白抗体IgG质控品包含2个水平的液体质控品，所述2个水平的液体质控品中抗组蛋白抗体IgG的靶值浓度范围分别为(20±4)RU/mL和(100±20)RU/mL；(3)试剂1号，含生物素标记的组蛋白抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；(4)试剂2号，含碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；(5)磁分离试剂，含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；(6)清洗液；所述试剂盒中试剂1号，试剂2号和磁分离试剂的含量比为1:3:1，所述含量比为体积比。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒的材质为Fe2O3；所述磁微粒表面包被有羧基基团，包被物中羧基基团含量大于20wt％，所述磁微粒的大小为1-3μm。3.一种制备如权利要求1-2任一项所述试剂盒的方法，其包括如下步骤：(1)配制抗组蛋白抗体IgG校准品：步骤1)配制抗组蛋白抗体IgG校准品稀释液：将纯化水、Tris、氯化钠和Proclin300加入容器中，充分搅拌至完全溶解，Tris浓度为1wt％，氯化钠浓度为1wt％，Proclin300浓度为0.2v％；用4M的HCL将溶液的pH值调为7.0-7.5；将牛血清白蛋白加入容器中，充分搅拌至完全溶解，牛血清白蛋白的浓度为4wt％；再用4M的HCL将溶液的pH值调为7.0-7.5；用孔径为0.2μm的滤器过滤，得抗组蛋白抗体IgG校准品稀释液，2-8℃保存待用；步骤2)配制抗组蛋白抗体IgG校准品：将抗组蛋白抗体IgG用抗组蛋白抗体IgG校准品稀释液稀释至各浓度点为0，5，20，50，100，200RU/mL；(2)配制抗组蛋白抗体IgG质控品：将抗组蛋白抗体IgG用上述抗组蛋白抗体IgG校准品稀释液稀释至各浓度点为20，100RU/mL；(3)配制试剂1号：步骤1)配制试剂1号稀释液：将纯化水、Tris、氯化钠和Proclin300加入容器中，充分搅拌至完全溶解，Tris的浓度为1wt％，氯化钠浓度为0.5wt％，Proclin300的浓度为0.2v％；将牛血清白蛋白加入容器中，充分搅拌至完全溶解，牛血清白蛋白的浓度为0.5wt％；用4M的HCL将溶液的pH值调为7.0-7.5；用孔径为0.2μm的滤器过滤，得试剂1号稀释液，2-8℃保存待用；步骤2)配制试剂1号：将组蛋白抗原用纯化水溶解，2-8℃条件下用浓度为0.2MpH为9.0的碳酸盐缓冲液透析2h，然后浓缩至浓度为2-4mg/mL的抗原溶液，用浓度为0.2M，pH为8.5-9的碳酸盐缓冲液2CN105954267A权利要求书2/3页配制浓度为0.5-1.0mg/ml的生物素溶液；按照组蛋白抗原与生物素质量比为10:1的比例在组蛋白抗原溶液中