一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106596960A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201710011778.6(22)申请日2017.01.09(71)申请人严银芳地址430000湖北省武汉市武昌区高家湾新一村5-1-601号(72)发明人严银芳严文馨刘军高平(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法(57)摘要本发明公开了一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒及检测方法，该试剂盒的组成如下：载玻片2个；水化溶液300μL；阳性病毒血清20μL；阴性病毒血清20μL；其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/LTHYRESFUS-Anti-VMoAb结合物的PBS液。本发明利用免疫学检测技术快速诊断病毒感染，且检测结果特异性高、敏感性强、肉眼易判断，适合于现场快速检测。CN106596960ACN106596960A权利要求书1/2页1.一种病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的组成如下：其中，水化溶液含10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，250mg/LTHYRESFUS-Anti-VMoAb结合物的PBS液。2.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物通过以下方法制备得到：(1)用0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液将25％戊二醛稀释至5％；(2)取1mg/mL病毒单克隆抗体0.5mL，加0.5ml5％戊二醛，37℃水浴结合2h；(3)加入220.0g/LNaCl0.1ml充分混匀后，置4℃10min预冷；(4)加冷无水乙醇2.4ml，颠倒混合，立即1000r/min离心10min；(5)弃上清，沉淀用冷80％乙醇洗一次，将离心管倒置，控干；(6)加入0.05mol/LPH9.5碳酸盐缓冲液0.5ml溶解沉淀物；(7)将150μgTHYRESFUS溶于0.5ml0.15mol/LNaCl，再与醛化病毒单克隆抗体溶液混合；(8)加入1.0mol/LpH9.5新型生物感应显色物质，调节pH值至9.0-9.5；(9)于4℃，电磁搅拌下结合24h；(10)加入0.1ml0.2mol/L赖氨酸，以封闭残留的醛基，终止反应；(11)4℃放置2h；(12)将反应物通过SephadexG-200凝胶柱，用PBS洗脱，收集第一洗脱峰；或将反应物装入透析袋，对0.01mol/LpH7.2PBS，4℃透析过夜并收集；浓缩收集液即为THYRESFUS-Anti-VMoAb结合物，用PBS调节THYRESFUS-Anti-VMoAb至浓度250mg/L，并加入终浓度10g/L牛血清白蛋白，100mL/L甘油，得到水化溶液。3.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述阳性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阳性的血清。4.根据权利要求1所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述阴性病毒血清是经自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒检测为阴性的血清。5.根据权利要求3或4所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述自制的病毒双抗夹心ELISA试剂盒的制备及检测方法如下：20μg/mL病毒单克隆抗体包被ELISA反应板，37℃保温2h，洗板3次，加含1％牛血清白蛋白的PBS封闭液37℃，3h，PBS洗2次；加入1∶100稀释的待检血清100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的病毒兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；加入效价为1∶1000的HRP标记羊抗兔抗体100μL，37℃保温30分，洗板3次；TMB-H2O2显色，目测和仪器判断结果。6.根据权利要求5所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，其特征在于，所述病毒为麻疹病毒或巨细胞病毒。2CN106596960A权利要求书2/2页7.一种病毒感染的免疫学快速检测方法，其特征在于，采用权利要求1至6中任一权利要求所述的病毒感染的免疫学快速检测试剂盒，包括以下步骤：1)反应：取一洁净的载玻片上，分别标记为阳性对照孔、测试孔和阴性对照孔，在每孔用移液枪加入12μL的水化溶液，往阳性对照孔中加入3μL阳性病毒血清，而往测试孔中加入3μL待测血清，阴性对照孔加3μL阴性病毒血清，迅速混匀；将载玻片放入一湿盒内，将湿盒放入37℃保温箱反应30分钟；2)结果判断：37℃反应30分钟后，立刻取出湿盒；以一张白纸或白色泡沫盒为背景，通过反应溶液颜色的变化，即判断检测结果；如果溶液为无色，则说明病