正交试验法优化香附总黄酮提取工艺.docx

正交试验法优化香附总黄酮提取工艺正交试验法优化香附总黄酮提取工艺   【摘要】 目的优选香附总黄酮的提取工艺。方法以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为考察因素，以总黄酮含量为测定指标，采用正交试验优化香附总黄酮的最佳提取工艺。结果香附总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数70%、料液比1∶15、提取时间45min、提取次数为2次。结论该提取工艺稳定，适合香附总黄酮的提取。   【关键词】 香附;总黄酮;正交试验;提取工艺   Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractiontechnologyoftotalflavonoidsfromCyperusRotundus.MethodsOrthogonalexperimentwasdesignedwiththecontentoftotalflavonoidsasindex,andwithethanolconcentration,theratioofmaterialandsolvent,extractingtimeandfrequencyasfactors.ResultsTheoptimalextractiontechnologywasasfollows：70%ethanol,theratioofmaterialtosolventof1∶15,extractingfor45minand2times.ConclusionTheextractiontechnologyissteadyandsuitableforextractingtotalflavonoidsfromCyperusRotundus.Keywords:CyperusRotundus;totalflavonoids;orthogonalexperiment;extractiontechnology香附为莎草科多年生草本莎草(CyperusrotundusL.)的干燥根茎，性辛、微苦、微甘、平,归肝、三焦经，具有疏肝理气、调经止痛的功效[1]。香附主要含有挥发油、黄酮类化合物、三萜类化合物、甾醇类、生物碱、糖类、酚类等化学成分[2]。现有研究已证明黄酮类化合物在治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病等方面有显著效果，还具有抑菌、抗癌等作用，且无副作用，已开发出许多种药品和保健食品[3-5]。已有的文献资料未见有关香附黄酮类物质提取工艺的研究报道，故本试验对香附总黄酮的提取工艺以及含量进行初步研究，为香附总黄酮的进一步研究开发提供资料。1仪器与试药1.1仪器Agilent8453E型紫外-可见分光光度计(美国安捷伦公司);BP211D电子分析天平(德国Sartorius);KQ-500超声仪(昆明市超声仪器有限公司，功率500W，频率40kHZ);层析柱(2.5cm×14cm)。1.2试药香附药材购自安徽亳州药材市场，经湖北医药学院附属人民医院药学部雷龙副教授鉴定为莎草科植物(CyperusrotundusL.)的干燥根茎;芦丁对照品(批号：10080-200306)购自中国药品生物制品检定所;聚酰胺(30～60目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂);水为重蒸水;其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1供试品溶液的制备取香附粉末(过2号筛)3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(60~90℃)50mL，超声提取30min，弃去石油醚液，待样品中残留的石油醚全部挥去后，按实验要求加入不同体积乙醇(不同体积分数)超声提取不同时间、次数，放凉后滤过，滤液置80℃水浴锅上浓缩至适量。称取聚酰胺3g，以样品溶液拌样后置80℃水浴锅上加热至无醇味，装入层析柱中。用蒸馏水100mL、20%(体积分数)乙醇50mL、60%(体积分数)乙醇300mL依次进行洗脱，收集60%(体积分数)乙醇洗脱液，置水浴锅上浓缩，用60%(体积分数)乙醇定容至25mL，即得。2.2对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的芦丁对照品20.08mg，置10mL容量瓶中，加60%(体积分数)乙醇溶解至刻度，摇匀，即得。2.3测定波长的选择取供试品溶液和对照品溶液各1mL，置于10mL容量瓶中，加入5%(质量浓度)NaNO2溶液0.3mL，摇匀，放置6min，再加入10%(质量浓度)Al(NO3)3溶液0.3mL，摇匀，再放置6min，加入4%(质量浓度)NaOH溶液4mL，加60%(体积分数)乙醇定容到10mL，放置15min，即得。用紫外分光光度计进行扫描，结果两者在499.9nm处均有最大吸收，故选择500nm作为测定波长。2.4线性关系考察分别精密量取芦丁对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0