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押江苏卷第24题基因工程 从近几年的新课标卷的考查知识点来看,第24题主要考查基因工程知识。 基因工程的流程和应用是高考的必考点,且常考常新,预计2023年高考也不例外,依然会 对其进行考查,有可能与新的科研实事结合,综合考查基因工程的流程和应用,比如新冠病 毒疫苗的研发,还可能与细胞工程、胚胎工程等综合起来考查。 能准确识记课本内容,会正确分析图形,并从题干中摘取关键信息,规范答题。能够结合背 景材料分析问题、解决问题。从题图中提取有效信息并结合这些信息,运用所学知识与观点, 通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理,做出合理的判断或得出正 确结论。把握知识间的内在联系,要求能运用所学知识解决生活中的一些实际问题,或运用 所学知识解释生活中的一些现象 (2022江苏卷T24).纤毛是广泛存在的细胞表面结构,功能异常可引起多种疾病。因此,研 究纤毛形成的作用机制具有重要意义。请回答下列问题。 (1)纤毛结构如图1所示,由细胞膜延伸形成的纤毛膜主要由中心体转变而来,中心体在 有丝分裂中的功能是__________________。 (2)某病人肾小管上皮细胞纤毛异常,为了分析纤毛相关基因X是否发生了变异,对基因 X进行了PCR扩增与产物测序。从细胞样品中分离DNA时,可通过交替调节盐浓度将与核 蛋白结合的DNA分离出来,溶液中添加NaC1至2.0mo1/L的目的是__________________。 PCR扩增时,需在__________________催化下,在引物__________________端进行DNA链 1 的延伸,获得扩增产物用于测序。 (3)为研究蛋白质X在细胞中的定位,构建绿色荧光蛋白GFP与X的融合蛋白,融合蛋 白具有绿色荧光,可示其在细胞内位置。将X-GFP基因融合片段M导入如图Ⅱ所示载体质 粒Y,构建Y-M重组质粒(在EcoRⅤ位点插入片段)。请完成下表。 分步实验目标简易操作、结果、分析 PCR鉴定正向重组质粒Y-M ①选择图Ⅱ引物_____________; (图Ⅱ中融合片段M中有白色 ②PCR目的产物约为_____________bp。 的箭头,代表方向) 确保M及连接处序列正确, Y-M的连接处上游含有Hind ③质粒测序,图Ⅲ中正确的是____________(选填序列编 III+EcoRV的识别序列,下游 号) 含有EcoRV+BamHI的识别序 列 ④对照质粒Y-GFP(仅表达GFP)与实验质粒Y-M分别 检测融合蛋白定位导入细胞,发现对照组整个细胞均有绿色荧光,而实验组 荧光集中在纤毛基部,说明________________________。 (4)为研究另一纤毛病相关基因Z表达的变化,采用荧光定量PCR法检测健康人与病人基 因Z的转录水平。采集样本、提取总RNA,经_____________形成cDNA作为模板,PCR 扩增结果显示,在总cDNA模板量相等的条件下,健康人Ct值为15,而病人Ct值为20(Ct 值是产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数)。从理论上估算,在PCR扩增20个循环 的产物中,健康人样品的目的产物大约是病人的_____________倍。 【答案】(1)与有丝分裂有关(参与纺锤体的形成,是纺锤体形成中心) 2 (2)Ⅱ.溶解DNAⅡ.耐高温DNA聚合酶(Taq酶)Ⅱ.3' (3)Ⅱ.a、bⅡ.1100Ⅱ.Q4Ⅱ.X蛋白参与中心体的形成 (4)Ⅱ.逆转录Ⅱ.32 【解析】 【分析】PCR技术的条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶 (Taq酶);PCR的操作过程:Ⅱ高温变性:DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不 需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开);低温复性:引物结合到互补链DNA上;Ⅱ中温 延伸:合成子链。 【小问1详解】 中心体与有丝分裂有关,是纺锤体的组织中心。 【小问2详解】 从细胞样品中分离DNA时,可通过交替调节盐浓度将与核蛋白结合的DNA分离出来,DNA 在2.0mo1/L的NaC1溶液中的浓度最大,高于或低于这一浓度,DNA的溶解度均会下降, 因此实验过程中添加NaC1至2.0mo1/L的目的是溶解DNA。PCR扩增时,需在耐高温的 DNA聚合酶(即Taq聚合酶)的催化下,在引物的3’端进行DNA链的延伸,获得扩增产 物用于测序。 【小问3详解】 PCR扩增目的DNA片段时,在引物的3’端进行DNA链的延伸,据图可知,应选择图II中 的引物a和引物b,PCR目的产物约为300+800=1100bp。确保M及连接处序列正确,Y-M 的连接处上游含有HindIII+EcoRV的识别序列,下游含有EcoRV+BamHI的识别序