一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106053805A(43)申请公布日2016.10.26(21)申请号201610582015.2(22)申请日2016.07.21(71)申请人新疆农垦科学院地址832000新疆维吾尔自治区石河子市乌伊公路221号申请人孙凤霞(72)发明人孙凤霞康立超彭夏雨杨井泉罗小玲李红敏党富民向晓黎王东健罗瑞峰(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条及其制备方法，属于食品安全检测领域。该试纸条由样品垫、金标垫、包被膜和吸水膜依次粘贴组合到PVC底板上，所述金标垫上涂覆有树枝状聚合物-金-适配体复合物增敏探针，包被膜上具有检测线和质控线，检测线上包被有抗沙门氏菌单克隆抗体，质控线上包被有链霉亲和素。该试纸条的制备方法包括树枝状聚合物-金-适配体复合物增敏探针的制备、金标垫的制备、包被膜的制备以及试纸条的组装等。该试纸条利用树枝状聚合物-金-适配体复合物增敏探针进行信号放大，极大提高检测灵敏度，且操作简单、检测速度快，无需专用仪器设备，成本低廉，适合于大批量样品中沙门氏菌的高灵敏快速检测。CN106053805ACN106053805A权利要求书1/1页1.一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条，包括PVC底板(1)，在所述PVC底板(1)上依次粘贴有样品膜(2)，增敏探针金标结合垫(3)，硝酸纤维素膜(4)和吸水膜(5)四种粘贴物；所述相邻粘贴物之间相互连接叠放；所述硝酸纤维素膜(4)上依次设置有检测线(6)和质控线(7)；其特征在于，所述金标结合垫(3)上包被有树枝状聚合物-金粒子-核酸适配体纳米复合物；所述树枝状聚合物为端巯基树枝状聚合物；所述核酸适配体为能特异性识别沙门氏菌的核酸适配体，其DNA序列的5’端被巯基标记，3’端被生物素标记；所述检测线(6)上包被有抗沙门氏菌单克隆抗体；所述质控线(7)上包被有链霉亲和素。2.制备权利要求1所述的试纸条，其特征在于包括如下操作步骤：(1)制备树枝状聚合物-金纳米粒子复合物(2)制备树枝状聚合物-金粒子-适配体复合物(3)将步骤(2)制备的树枝状聚合物-金粒子-适配体复合物喷涂到玻璃纤维膜上，喷液量为0.7uL/cm，制备金标结合垫，烘干备用。(4)在硝酸纤维素膜上的检测线位置喷涂抗沙门氏菌单克隆抗体溶液，在质控线位置喷涂链霉亲和素，烘干备用。(5)将样品膜、金标结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴组合到PVC底板上，相邻粘贴物之间的重叠部分长度为2mm，切成3mm宽的试纸条，与干燥剂一起封装于铝箔袋中保存备用。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所用胶体金的粒径为10nm；步骤(4)中所述喷涂于检测线位置的抗沙门氏菌单克隆抗体是浓度为1mg/mL的抗沙门氏菌单克隆抗体溶液；步骤(4)中所述喷涂于质控线位置的链霉亲和素是浓度为1.5mg/mL的链霉亲和素溶液。2CN106053805A说明书1/4页一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条及其制备方法技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种用于检测沙门氏菌的增敏型核酸适配体试纸条及其制备方法。背景技术[0002]沙门氏菌属于革兰氏阴性菌，是一种肠道杆菌致病菌，在自然界中广泛存在，极易污染水源、肉类(尤其是禽类)、蛋类及蛋制品等，人或动物食用被污染的食品即会引发食物中毒。目前，在全世界范围内，特别是发展中国家沙门氏菌感染事件逐年增多，我国70～80％的细菌性食物中毒是由沙门氏菌引起的，可见沙门氏菌污染已经严重威胁到人类健康和公共食品卫生安全。因此，建立准确、灵敏、快速的沙门氏菌检测技术对于保障食品安全和国民健康具有重要意义。[0003]目前沙门氏菌检测方法主要有传统的微生物检验技术、仪器分析法、分子生物学技术和免疫检测方法等。其中，传统的微生物检测技术存在操作复杂，检测时间长，灵敏度和特异性不高等缺点；仪器分析法简单快速，但仪器设备价格昂贵，不适合现场快速检测；分子生物学方法能缩短检验时间，灵敏度和特异性好，但费用昂贵，易污染，假阳性偏高；ELISA方法灵敏、快速、特异性好，已广泛的应用于食品中微生物的检测，但其结果解读或者配套仪器较复杂，需要一定的专业知识。[0004]而金标层析试纸条正好可以避免这些弊端，不需要专用仪器，只需要插入、比对即可，具有快速、低成本，操作简单易行，能满足绝大部分食品样品的检测，非常适用于大量样品的初筛。但是，常规的金标试纸条灵敏度较低，难以