烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备.pdf

昆虫学报!"#$%&#’(’)’*+"$+&+"$!"#$%&&’(（)*）：**+*(-.//0&(’(12%32"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备郝婵娟-柴宝峰-王伟-孙毅%梁爱华-!（-K山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原&*&&&2；%K山西省农业生物技术研究中心太原&*&&*-）摘要：将烟草天蛾-$&./"$012#$几丁质酶基因克隆入融合表达载体F4G1%)6并在大肠杆菌%="’)+LM%-（N4*）中进行诱导表达。表达菌株经&K’55C8OM.PGQ诱导2R)B后几丁质酶表达并形成包涵体。在07%S10G@亲和柱上经变、复性和纯化得到可溶的几丁质酶。表达产物经T$;A$D#印迹鉴定。采用切胶回收的方法切割回收包涵体并将回收产物免疫新西兰大白兔4M./@检测抗体效价达-U%&&&&。T$;A$D#印迹检测证明抗体特异性良好。关键词：烟草天蛾；几丁质酶；原核表达；变性和复性；T$;A$D#印迹；抗体制备中图分类号：V322文献标识码：@文章编号：&(’(12%3（2%&&’）&*1&**+1&’!"#$%&&’()#*$’+’-.’()-)/#(010()-0-).’2(/1#$%#-$-.’()(+!"#$%&"’()*"3’.’)-&%W@XYB6#1!"6#-YW@.L6C1Z$#H-T@0QT$7-/[0\7%M.@0Q@71W"6-!（-K]$^M6_CD6ACD^CEYB$57?68L7C8CH^6#>‘C8$?"86D4#H7#$$D7#HCEAB$‘7#7;AD^CE4>"?6A7C#.#;A7A"A$CEL7CA$?B#C8CH^/B6#<7[#7J$D;7A^G67^"6#&*&&&2YB7#6；%KGB$@HD71L7CA$?B#C8CH^I$;$6D?BY$#A$DCE/B6#<7PDCJ7#?$G67^"6#&*&&*-YB7#6）42&.$-.：GB$?B7A7#6;$H$#$CE-$&./"$012#$a6;?8C#$>7#ACAB$E";7C#$<FD$;;7C#J$?ACDF4G1%)66#>$<FD$;;$>7#%="’)+LM%（-N4*）BC;A?$88;=@EA$DAB$$<FD$;;7C#;AD67#a6;7#>"?$>ECD2)BC"D;_^&K’55C8OM.PGQAB$E";7C#FDCA$7#?B7A7#6;$a6;$<FD$;;$>6#>>$A$?A$>7#7#?8";7C#_C>7$;=@EA$D>$#6A"D$6#>D$#6A"D$FDC?$>"D$7#07%S10G@6EE7#7A^?BDC56ACHD6FB^?C8"5#;C8"_8$?B7A7#6;$a6;C_A67#$>=GB$6"AB$#A7?7A^CE+&3+#4’D$#6A"D$>FDCA$7#a6;?C#E7D5$>_^T$;A$D#_8CA=GB$7#?8";7C#_C>^FDCA$7#_6#>7#/N/1P@Q4a6;$<?7;$>6#>AB$FDCA$7#a6;$<AD6?A$>=GB$#AB$F"D7E7$>FDCA$7#a6;7#9$?A$>7#AC0$ab$686#>D6__7A;AC7#>"?$755"#CD$6?A7C#=GB$7#>"?A7C#a7ABAaC7#9$?A7C#;86;A$>ECD(’>6^;6#>AB$#AB$6#A71;$D"5a6;FD$F6D$>=4M./@6#68^;7;;BCa$>AB6AAB$A7A$DECDAB7;FC8^?8C#686#A7_C