一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106069774A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610564784.X(22)申请日2016.07.19(71)申请人福建农林大学地址350002福建省福州市仓山区上下店路15号(72)发明人朱强叶善汶蔡昌杨唐晓珊朱彩萍尹腾飞(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图7页(54)发明名称一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法(57)摘要本发明公开了一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，属于林木快繁领域。该方法包括外植体的选择、愈伤组织的诱导培养和增殖培养、胚状体的诱导和萌发、生根、壮苗、炼苗和移栽入土。本发明提供的诱导培养基、增殖培养基、诱导生芽的培养基和生根培养基，使得麻竹分化效率高、增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。本发明建立了由麻竹的营养组织为起始的愈伤诱导体系，并成功获得再生植株，为麻竹苗的快繁提供了一种技术手段，为将来的麻竹转基因体系建立提供平台。CN106069774ACN106069774A权利要求书1/1页1.一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）外植体的选择：取多年生的麻竹幼嫩枝条为外植体，经流水冲洗2-3小时，70wt%的乙醇表面消毒45秒，无菌水冲洗3-5次，后用0.1wt%的升汞震荡消毒，消毒的时间为8分钟，无菌水冲洗5-10次；后用无菌纸吸干表面水分，作为外植体备用；（2）愈伤组织的诱导培养和增殖培养：将步骤（1）得到的无菌外植体切成0.5-1cm的小段，放在愈伤组织的诱导培养基上，黑暗条件下培养30-40天后愈伤组织开始形成；诱导出的愈伤组织呈现多种状态，分离淡黄色且致密的胚性愈伤组织，接种到增殖培养基上，在黑暗状态下进行培养，每两周更换一次培养基，增殖培养时间为3-4周；（3）胚状体的诱导和萌发：分拣步骤（2）增殖良好的愈伤组织接种到诱导生芽的培养基上，光照条件下培养30-50天，胚状体逐渐诱导生芽；诱导生芽的培养条件是：光照16h，光照强度2000lux；（4）生根：将步骤（3）中诱导出的丛生芽从愈伤组织中分离，每3-5株为一个单位放置入生根培养基中；（5）壮苗、炼苗和移栽入土：步骤（4）中生根培养基中的组培苗在生根的同时进行芽的增殖，在组培苗生根3-4根后放入自来水中呈半开瓶状态炼苗2-3天，后将植株从培养基中取出，洗净培养基后，再放置1天；移栽入土后，温室培养1-2周，温室培养条件为：光照16h，强度2000lux，温度21-26℃；随后进行遮荫散光培养，每天喷水，湿度保持在40wt%-60wt%。2.根据权利要求1所述的麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：步骤（2）所述的愈伤组织的诱导培养基：MS+BAP0.3mg/L+2,4-D4mg/L+IBA0.2mg/L+2-（N-吗啉代）乙磺酸0.5g/L+蔗糖50mg/L+琼脂粉8g/L，PH为5.0。3.根据权利要求1所述的麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：步骤（2）所述的增殖培养基：MS+蔗糖50mg/L+PVP0.5g/L+2,4-D4mg/L+琼脂粉8g/L，PH为5.8。4.根据权利要求1所述的麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：步骤（3）所述的诱导生芽的培养基：NB培养基+蔗糖30g/L+6-BA3mg/L+1.5mg/LKT+NAA0.1mg/L＋250mg/LPVP+琼脂粉8g/L，PH为5.8。5.根据权利要求1所述的麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的生根培养基：MS+NAA0.2mg/L+琼脂粉8g/L，PH为6.0。2CN106069774A说明书1/4页一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法技术领域[0001]本发明属于林木快繁领域，具体涉及一种麻竹茎端诱导愈伤组织并获得再生植株的方法。背景技术[0002]麻竹是禾本科竹亚科牡竹属麻竹亚属，在福建台湾广东广西贵州云南等部自然分布，是中国华南及东南沿海地区重要的笋材两用的大型丛生竹种之一，具有极高的经济价值和社会价值。麻竹组织培养相关的研究比较少，目前主要以花药及种胚为主要的外植体。1987年，Yeh等由麻竹的种胚为材料，成功诱导出麻竹的愈伤组织并获得再生植株，但是由于麻竹的开化周期很长，因此种子不易获得，导致该方法的取材方面的限制。1990年Tsay等利用麻竹的花药诱导出愈伤组织后获得再生植株，但通过该方