一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107099474A(43)申请公布日2017.08.29(21)申请号201710333734.5C12R1/38(2006.01)(22)申请日2017.05.12(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20160992016.03.08(71)申请人山东省烟台市农业科学研究院地址265500山东省烟台市福山区港城西大街26号(72)发明人李宝燕王英姿王培松(74)专利代理机构烟台双联专利事务所(普通合伙)37225代理人张媛媛(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A01N63/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页A01P3/00(2006.01)序列表1页附图4页(54)发明名称一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌及其应用(57)摘要本发明涉及一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌，以及该菌株在果树及大田作物病害防治中的应用，属于生物技术领域。一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌，分类命名为绿针假单胞菌（Pseudomonaschlororaphis），株号为YTBTa14，保藏编号为CCTCCNO:M2016099，16SrDNA序列如序列表所示。本发明具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌，其菌体和发酵液均具有较强的广谱的果树真菌病害抗菌活性，且抗菌效果持久、稳定，具备从中开发出新型、高效、广谱生防杀菌剂的巨大潜力，为微生物应用于生物防治的开发提供了新的途径。CN107099474ACN107099474A权利要求书1/1页1.一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌，其特征在于：分类命名为绿针假单胞菌（Pseudomonaschlororaphis）YTBTa14，保藏编号为CCTCCNO:M2016099，16SrDNA序列如序列表所示。2.一种如权利要求1所述具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌获取方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：⑴.用自来水洗净表面并晾干，分别取其根、茎、叶进行表面消毒，加纯净水磨碎，静置10min；⑵.取80ul上清液，稀释涂布NA固体培养基上，置于28℃培养箱中培养3～7d，根据菌落形态特征挑取单菌落，纯化后保存，即得内生细菌菌饼；⑶.将苹果轮纹病菌、樱桃疫霉病菌、葡萄炭疽病菌、葡萄白腐病菌、葡萄霜霉病菌、小麦纹枯病菌在专用培养基上培养，待病原菌长满平板后用打孔器在平板边缘打取菌块，放于另一个无菌平板中央；⑷.在病原菌菌块的四周沿四个方向等距离2.5cm处放置相同直径的内生细菌菌饼，并置于25℃培养箱黑暗培养；⑸.观察、记录，筛选出具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌。3.一种如权利要求1所述具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌的发酵培养方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：⑴.将绿针假单胞菌菌株接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，在37℃培养温度下培养2~4天，得到种子液；⑵.将步骤⑴制备的种子液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在培养温度30℃下培养2~3天，得到发酵液；⑶.离心提取沉淀，取上清液，经细菌过滤器过滤，获得具有广谱抗菌活性的无菌发酵液。4.如权利要求3所述具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌的发酵培养方法，其特征在于：所述步骤⑵中种子液的接种量为1～2%。5.一种如权利要求1所述具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌制成的菌剂。6.一种如权利要求1所述具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌在苹果轮纹病、樱桃疫病、葡萄炭疽病、葡萄白腐病、葡萄霜霉病、小麦纹枯病方面的应用。2CN107099474A说明书1/6页一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌，以及该菌株在果树及大田作物病害防治中的应用，属于生物技术领域。背景技术[0002]小麦、果树是世界上重要的经济作物，常年受到多种病害的危害，每年因病害造成的经济损失难以估计。目前农药是防控病虫害的最有效手段之一，但是因化学农药的广泛使用而引起的各种问题也随之而来，如农药残留、环境污染、病虫害抗药性的产生等，不利于农业的可持续发展。因此，禁止和限制大量高毒、高残留农药的使用，开发和使用生物源农药已成为保护环境和促进农业发展的重要研究课题。[0003]生物防治是指利用生物及其代谢产物防治植物病虫害方法。它的实质就是利用生物种间关系、种内关系，调节有害生物种群密度，即生物群防治生物群。与传统的防治技术相比，生物防治技术具有不污染环境、对人和其他生物安全、产品无残留、易于同其他植物保护措施协调配合并能节约能源等优点，必将在有害生物综合防治中发挥着越来越重要的作用。到目前为止，真菌、细菌、放线菌、酵母菌都可用于生物防治。利用细菌防治有害微生物是开发和利用微生物资源的重要研究领域之一，亦是最具有潜力、应用前景最为广阔的有效途径之一。