猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107099506A(43)申请公布日2017.08.29(21)申请号201710269905.2C07K16/10(2006.01)(22)申请日2017.04.24G01N33/569(2006.01)C12R1/91(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO：C2017102017.02.15(71)申请人江苏省农业科学院地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街50号(72)发明人李彬何孔旺孙杰俞正玉范宝超郭容利茅爱华倪艳秀温立斌袁万哲张雪寒肖琦(74)专利代理机构南京汇盛专利商标事务所(普通合伙)32238代理人袁静(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书9页C12N5/20(2006.01)序列表3页附图1页(54)发明名称猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物检测领域。抗PEDVN蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEDV，保藏编号为CCTCCNO:C201710。猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，包括预包被酶标板和酶标记抗体，预包被酶标板是采用所述抗PEDVN蛋白单克隆抗体包被的酶标板，酶标记抗体是辣根过氧化物酶标记的抗PEDVN蛋白多克隆抗体；抗PEDVN蛋白多克隆抗体通过用猪流行性腹泻病毒N蛋白免疫兔子，获取兔子血清后纯化获得。本发明试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性好，能够快速、简便、高效的定量检测猪流行性腹泻病毒，成本低、适合高通量检测。CN107099506ACN107099506A权利要求书1/1页1.分泌抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEDV，保藏编号为CCTCCNO:C201710。2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体。3.权利要求2所述抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体在制备检测猪流行性腹泻病毒试剂盒方面的应用。4.猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，包括预包被酶标板和酶标记抗体，所述预包被酶标板是采用权利要求2所述抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体包被的酶标板，所述酶标记抗体是辣根过氧化物酶标记的抗猪流行性腹泻病毒N蛋白多克隆抗体；所述抗猪流行性腹泻病毒N蛋白多克隆抗体通过用猪流行性腹泻病毒N蛋白免疫兔子，获取兔子血清后纯化获得。5.根据权利要求4所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于所述猪流行性腹泻病毒N蛋白是通过诱导表达携带SEQIDNO:1所示N蛋白编码基因的重组菌获得的。6.根据权利要求4或5所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的包被浓度为2μg/mL，酶标记抗体的浓度为2μg/mL。7.根据权利要求6所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括标准品冻干粉、样品稀释液、显色剂、终止液和洗涤液；所述标准品冻干粉为PEDV重组N蛋白；所述样品稀释液为0.01mM、pH值为7.4的PBS缓冲液；所述洗涤液的溶剂是0.01mM、pH值为7.4的PBS缓冲液，溶质为吐温-20，吐温-20在洗涤液中的体积百分浓度为0.2%；终止液：2M的硫酸水溶液；显色剂包括辣根过氧化物酶催化底物A液和B液；所述辣根过氧化物酶催化底物A液是含有H2O2的溶液；所述辣根过氧化物酶催化底物B液是含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的溶液。2CN107099506A说明书1/9页猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物检测领域，具体涉及猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用。背景技术[0002]猪流行性腹泻病毒(PorcineEpidemicDiahorreaVirus，PEDV)是猪肠道传染病病原，能够引起猪呕吐、腹泻和脱水，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪等各年龄段均可发病，但哺乳仔猪中的感染率最高。该病多发生在冬春寒冷季节，以12月至次年2月为高发季节。[0003]2010年冬季至2011年春季全国各地猪场的猪群中先后发生严重的传染性腹泻疾病，发病突然，传播较快，流行范围广，流行时间长，应用各种抗生素防治无效，其发病率达80％左右，死亡率高达50％～85％，造成重大的经济损失。[0004]此前，对PEDV病原的检测多用常规的RT-PCR检测方法，操作繁杂、耗时长、成本较高、不能定量检测，只能定性判断，且不能高通量检测。另一种韩国的胶体金检测试纸条灵敏度较低、且不能定量、价格较贵，不适合高通量抗原检测。发明内容[0005]本发明提供一种猪流行性腹泻