天然药物化学成分提取分离.ppt

第二章天然药物有效成分提取分离技术第一节有效成分的提取与分离一、有效成分的提取（一）溶剂提取法（二）水蒸气蒸馏法适用范围：水蒸气蒸馏是分离和纯化与水不相混溶的挥发性有机物常用的方法。（三）升华法适用于有升华性质的成分。二、有效成分的分离和精致（一）系统溶剂分离法（二）两相溶剂萃取法（三）沉淀法（四）吸附法（五）盐析法（六）透析法第二节结晶和重结晶第三节色谱分离法一、吸附色谱法1.硅胶一种酸性吸附剂，使用于分离中性和酸性成分（1）用法（2）型号2.氧化铝由氢氧化铝灼烧而得，分为碱性、中性和酸性三种（1）用法（2）型号3.活性炭非极性吸附剂作用分离氨基酸、糖类和苷类等水溶性成分极性顺序：石油醚<环己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水混合溶剂1.极性吸附剂被分离得化合物极性基团极性越大、数量越多吸附力越强，共轭双键越多吸附力越强。2.非极性吸附剂极性越小吸附力越强。操作方式中药柱层析设备二、分配色谱法（一）基本原理（二）支持剂（三）分配色谱种类正相分配色谱反相分配色谱（四）操作方式1.纸色谱2.分配薄层色谱3.分配柱色谱（一）聚酰胺结构（二）基本理论－氢键聚酰胺柱色谱四、离子交换色谱法五、大孔吸附树脂法六、凝胶色谱法1.分类2.分离原理3.应用七、高效液相色谱法八、气相色谱法第四节天然药物有效成分结构测定一、结构测定的主要程序纯度鉴定纯度确定--最基本的条件●某些成分或功能基，可以和一些特定试剂产生各种颜色或沉淀，有助于判断化合物类型和功能基：生物碱类大都能和生物碱沉淀试剂产生沉淀；羟基葸醌类遇碱呈红色；盐酸一镁粉试剂能和许多黄酮类化合物呈色。●鉴别功能基的化学反应：三氯化铁反应、三氯化铝反应等等。利用在酸水或碱水中的溶解度情况，提示该化合物碱性功能基或酸性功能基的存在以及有无内酯、内酰胺结构。利用在酸水或碱水中的溶解度情况，提示该化合物碱性功能基或酸性功能基的存在以及有无内酯、内酰胺结构。●化学降解法将复杂分子通过氧化、还原等化学反应，降解为几个结构比较简单又稳定的小分子化合物，通过对降解产物的结构鉴定，再按降解机理合理地推导出原来可能的化学结构式。化学降解法波谱方法—主要手段紫外光谱用波长在200～400nm之间的连续光扫描记录下来的图谱，吸收带比较宽；红外光谱用波长在800nm～20μm之间的连续光扫描记录下来的图谱，谱线比较尖锐；岛津2450/2550PC核磁共振仪测定范围：波数200～400nm之间作用：提供基本骨架信息;样品中杂质的测定定量分析特点：液态样品才能测定；常规紫外光谱仪价格低廉；样品用量少（只需5-10μg）生色团产生紫外吸收的不饱和基团，如C=C,C=O,O=N=O等；助色团：其本身是饱和基团（常含有杂原子），它连到生色团上时，能使后者吸收波长变长或吸收强度增加，如-OH,-NH2,-Cl等；深色位移：由于基团取代或溶剂效应，最大吸收波长变长，也叫红移（redshift）；浅色位移：由于基团取代或溶剂效应，最大吸收波长变短，也叫蓝移（blueshift）；具有相同基本骨架化合物的UV光谱相同，但并非是同一化合物；测定范围波数600～4000cm-1之间，其中1600cm-1以上为化合物的特征基团区，1000-500cm-1为指纹区。作用主要用于定性分析，功能基的确认，芳环取代类型的判断等。优点：任何气态、液态、固态样品均可测定；每种化合物都有红外吸收；常规红外光谱仪价格低廉；样品用量少（只需5-10μg）●如果被测定物是已知物，只要和已知对照品做一张共红外光谱图，二者红外光谱完全一致则为同一物质；●如无对照品也可检索有关红外光谱数据图谱文献。●1945年，F.Bloch和E.M.Purcell几乎同时发现了核磁共振现象，获得1952年诺贝尔物理奖。●核磁共振仪器的发展：406090100300500600750MHz●核磁共振：●天然药物化学成分以有机物为主，分子结构中必然有C、H原子，它们的结合类型、化学环境不同，均可用NMR测定，是天然化合物结构测定的重要手段。●氢核磁共振（1H-NMR)谱：化学位移范围：在0～20ppm三大要素：化学位移(ppm)、偶合常数(J)及峰面积。灵敏度高，样品用量少（1～5mg），测试时间短●碳核磁共振（13C-NMR)谱：化学位移范围：在0～250ppm要素：化学位移(ppm)灵敏度较低，样品用量较多（5～20mg），测试时间长C=ODEPT-135适用范围：信号过于复杂、重叠严重时，而对结构推断产生困难时，可以简化谱图，有助判断；特点：对测试仪器要求比较高（超导核磁共振仪）；谱图测试价格比较贵；测试时间长，样品用量比较多（只需5