牛结核病血清学诊断标志物及其临床应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113884685A(43)申请公布日2022.01.04(21)申请号202111208878.0(22)申请日2021.10.18(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人周向梅王元智梁正敏刘一朵葛昕(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人陈波(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页(54)发明名称牛结核病血清学诊断标志物及其临床应用(57)摘要本发明提供了牛结核病血清学诊断标志物及其临床应用。本发明通过转录组测序分析、小鼠动物实验和临床试验获得了能够鉴别牛结核病阴、阳性的血清标志物：KLK12、MMP‑1和MMP‑9。本发明提供的牛结核病血清学诊断标志物与结核菌素皮试的诊断结果可达到100％一致，并且能够鉴别诊断潜伏感染牛和活动性结核病牛，不受其他分枝杆菌感染的影响，具有较强的特异性和较高的灵敏度。本申请的诊断标志物为牛结核病的诊断提供了新的靶点，可用于制备牛结核病的血清学诊断试剂盒，无需采集抗凝血和特异性抗原刺激，简化操作要求，提高诊断效率，有助于结核病牛的批量、快速检测和淘汰，为牛结核病的防控和净化提供了技术支撑。CN113884685ACN113884685A权利要求书1/1页1.牛结核病诊断相关标志物，其特征在于，所述牛结核病诊断相关标志物选自KLK12、MMP‑1、MMP‑9中的一种或多种。2.检测牛结核病诊断相关标志物的试剂在制备牛结核病诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述牛结核病诊断相关标志物选自KLK12、MMP‑1、MMP‑9中的一种或多种。3.检测牛结核病诊断相关标志物的试剂在制备牛结核病潜伏感染和开放性感染诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述牛结核病诊断相关标志物选自KLK12、MMP‑9中的一种或两种。4.根据权利要求1‑3任一项所述的标志物或应用，其中所述牛结核病诊断相关标志物为血清标志物。5.根据权利要求2‑4任一项所述的应用，其中所述试剂盒为ELISA试剂盒。6.根据权利要求1‑5任一项所述的标志物或应用，其中所述牛结核病诊断相关标志物为KLK12。7.根据权利要求2、4‑6任一项所述的应用，其中所述诊断试剂盒应用时，血清中KLK12浓度＜125ng/ml或者MMP‑1浓度＜6ng/ml时判定为结核病阳性；血清中KLK12浓度≥125ng/ml或者MMP‑1浓度≥6ng/ml时判定为结核病阴性。8.根据权利要求3‑6任一项所述的应用，其中所述诊断试剂盒应用时，结核病阳性牛血清中KLK12浓度≥41ng/ml，且血清中KLK12浓度＜125ng/ml时判为活动性结核病牛，即结核病阳性开放性感染牛；血清中KLK12浓度＜41ng/ml时判为非活动性结核病牛，即结核病阳性潜伏感染牛。9.根据权利要求3‑6任一项所述的应用，其中所述诊断试剂盒应用时，结核病阳性牛血清中MMP‑9浓度≥7ng/ml，且血清中MMP‑9浓度＜10ng/ml时判为活动性结核病牛，，即结核病阳性开放性感染牛；血清中MMP‑9浓度＜7ng/ml时判为非活动性结核病牛，即结核病阳性潜伏感染牛。2CN113884685A说明书1/5页牛结核病血清学诊断标志物及其临床应用技术领域[0001]本发明属于兽医领域中的牛结核病防治领域，具体地，本申请提供了牛结核病血清学诊断标志物KLK12、MMP‑1、MMP‑9及其在制备牛结核病诊断试剂盒中的应用背景技术[0002]结核病由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染性疾病，结核分枝杆菌和牛分枝杆菌(Mycobacteriumbovis，简称M.bovis)为主要致病菌，由牛分枝杆菌引起的牛结核病是一种重要的人畜共患病，也是危害畜牧业发展的重大传染病，而且严重威胁公共卫生和食品安全。研究显示牛分枝杆菌除感染牛外，还能感染不同种属的温血动物，包括灵长类、有袋、有蹄、食肉类、啮齿类和鳍脚类动物在内的50多种哺乳动物，还包括鸟类、北美洲乌鸦、石鸽等20多种禽类动物。此外，牛型分枝杆菌与人型结核分枝杆菌在基因水平上达到了99.95％的相似，人类食用未经巴氏消毒的奶制品或者与患病动物直接接触都有被感染的风险，有10％以上的结核病人(不同的国家和地区有不同的比例)是由牛分枝杆菌感染引起的。因此，对牛结核病的防控直接关系着畜牧业发展和人类健康。[0003]副结核病(Paratuberculosis)又称为副结核性肠炎，是由副结核分枝杆菌(Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis，MAP)引起的反刍动物的慢性消化道疾病，该病以顽固性腹泻、渐进性消瘦、肠黏膜增厚并形成皱襞为特